F-BL21(DE3)化学感受态细胞

特别提示：包括F-BL21(DE3)化学感受态细胞在内，本公司的所有产品仅可用于科研实验，严禁用于临床医疗及其他非科研用途！

产品名称：F-BL21(DE3)化学感受态细胞
英文名称：F-BL21(DE3)Chemically Competent Cell
产品货号：MQ0052
产品规格：10×100μl/50×100μl

BL21(DE3)菌株用于高效表达克隆于含有噬菌体T7启动子的表达载体(如 pET系列)的基因。
λ噬菌体DE3区含有T7噬菌体RNA聚合酶，该区整合于BL21的染色体上，所以称为BL21(DE3)。可同时表达T7 RNA聚合酶和大肠杆菌RNA聚合酶，用于pET系列，pGEX，pMAL等质粒的蛋白表达。F-BL21(DE3)感受态细胞经特殊工艺制作，无需42℃热激，37℃孵育步骤，只需冰浴，10min内完成转化、涂板操作，pUC19质粒检测转化效率可达1×107 cfu/μg DNA。
保存条件：-80℃
基因型：
F-ompT hsdSB(rB-mB-)gal dcm(DE3)
快速转化操作方法(10min)：
1.提前10分钟将用到的筛选培养基平板拿到37℃预热。
2.F-BL21(DE3)感受态细胞从-80℃拿出，迅速插入冰中，5分钟后待菌块融化，加入目的DNA并用手拨打EP管底轻轻混匀，冰中静置5分钟。
3.用200 μl枪将感受态细胞-DNA混合物转移到已经37℃预热的LB培养基上，涂均匀，表面无水渍。
4.将平板倒置放于37℃培养箱过夜培养。
快速热激转化操作方法(25min,可提高转化效率)
1.F-BL21(DE3)感受态细胞从-80℃拿出，迅速插入冰中，5分钟后待菌块融化，加入目的DNA并用手拨打EP管底轻轻混匀,，冰中静置5分钟。
2.42℃水浴热激45秒，迅速放回冰上并静置2分钟(晃动会降低转化效率)。加入700 μl不含抗生素的LB，37℃，200 rpm复苏10分钟，涂板(均匀，表面无水渍)。
3.将平板倒置放于37℃培养箱过夜培养。
注意事项：
1.F-BL21(DE3)感受态细胞也可进行热激操作，对于>7 kb质粒的构建，为了提高转化效率可按以下步骤操作：感受态细胞从-80℃拿出，插入冰中，5分钟后，加入目的DNA并用手拨打EP管底轻轻混匀，冰中静置10分钟。42℃水浴热激45秒，迅速放回冰中静置2分钟。加入700 μl LB，37℃，200 rpm复苏30分钟，涂板。
2.F-BL21(DE3)快速转化感受态细胞涂氨苄/羧苄青霉素抗性平板时效率较高，若涂卡那霉素或其他抗生素平板，转化效率下降(因无孵育步骤，卡那霉素等对菌体毒性较大)。若要提高卡那霉素或其他抗性质粒的转化效率，可按热激转化操作，增加孵育步骤。

我公司销售的F-BL21(DE3)化学感受态细胞质量上佳，价格普惠，欢迎广大新老客户踊跃订购。