Taq Plus DNA聚合酶

特别提示：包括Taq Plus DNA聚合酶在内，本公司的所有产品仅可用于科研实验，严禁用于临床医疗及其他非科研用途！

产品名称：Taq Plus DNA聚合酶
英文名称：Taq Plus DNA Polymerase
产品货号：JN0018
产品规格：250U

  本酶是Taq DNA聚合酶和Pfu DNA聚合酶按特定比例混合而成。Taq Plus DNA聚合酶具有Taq DNA聚合酶很强的DNA聚合能力，同时由于Pfu DNA的存在，具有一定的保真特性, 能部分纠正 DNA扩增过程中所出现的错误。与Taq DNA聚合酶相比，具有扩增长度 增加（简单模板可有效扩增20kb,复杂模板可有效扩增10kb), 保真度好的特点；与Pfu DNA聚合酶相比，具有扩增能力强，反应效率高的优 势。使用本制品扩增得到的PCR产物具有3′端"A"突出，因此可直接克隆于T载体中。

产品组成：

组份	JN0018-250U
Taq Plus DNA（5U/μl）	50μl
dNTP混合液（各10mM）	200μl
5×Taq Plus Buffer with Mg2+	1ml

产品用途：
1、可替代大部分Taq DNA聚合酶的用途；
2、需高灵敏度的PCR扩增；
3、大片段PCR扩增反应 (可达 20kb)。

使用建议：使用本制品扩增得到的PCR产物具有3′端"A"突出，可直接克隆于T载体中。

应用实例：


图例一）使用Taq Plus配制的50μl扩增体系中，以5ng λDNA为模板，对1kb～20kb片段的扩增结果。
泳道M：λ/HindIII；泳道1：1kb； 泳道2：2kb； 泳道3：4kb； 泳道4：6kb； 泳道5：8kb； 泳道6：10kb 泳道7：12kb 泳道8：20kb

图例二）50μl扩增体系中，分别以100ng～0.1ng小鼠基因组DNA为模板，可很好地扩增出1.1kb DNA片段（IL-1b 基因）。
泳道M：DNA Ladder 2000 泳道1：100ng； 泳道2：10ng； 泳道3：1ng； 泳道4：0.1ng

常用反应体系（50μl）

组分	体积
5× Taq Plus Buffer	5μl
上游引物	0.2-1.0μM(终浓度)
下游引物	0.2-1.0μM(终浓度)
dNTP(各10mM)	1.0μl
模板	1-50ng（质粒）
	10ng-1μg(基因组)
Taq Plus	0.25μl（1.25U）
ddH2O	至50μl
*Mg2+终浓度为2mM

质量保证：经多次柱纯化，SDS-PAGE检测纯度大于95%；PCR方法检测无大肠杆菌DNA残留、无核酸内、外切酶污染。

活性定义：在74℃条件下，30分钟内催化10nmol dNTP的掺入反应成为酸不溶性物质所需的酶量为一个单位。

除了Taq Plus DNA聚合酶,，我公司还供应以下相关产品：



名称：DMSO，PCR级
货号：BTN80205
规格：1.5mL
大量实验显示5-10%的DMSO能够促进PCR反应，尤其是高GC模板的PCR反应，本产品就是专门用于PCR或RT-PCR的高纯度DMSO。

储存条件：常温运输及保存，有效期一年。

名称：taq酶抗体
货号：BTN130815
规格：500U
Taq Antibody是Hot Start PCR用抗Taq抗体，其与Taq酶结合后抑制DNA聚合酶活性。使用本制品进行PCR扩增时，高温变性前抗Taq抗体与Taq酶结合抑制DNA聚合酶活性，能够在低温条件下有效抑制引物的非特异性退火及引物二聚体引起的非特异性扩增。抗Taq抗体在PCR反应zuì初的DNA变性步骤中变性，DNA聚合酶活性恢复，达到Hot Start PCR效果。使用本制品无需特殊的抗Taq抗体失活处理，可以在常规PCR反应条件下使用。其工作原理如下：


储存条件：低温运输，-20℃保存、有效期一年。

活性定义：Taq Antibody与Taq DNA Polymerase混合，25℃，10 min温浴后，在55℃，10 min条件下抑制90％以上的1U的Taq DNA Polymerase活性的Taq Antibody量定义为1U。

纯度：
1. 10 U的Taq Antibody和1μg的λDNA-Hind III在37℃或70℃下反应1小时，DNA的电泳谱带不发生变化。
2. 10 U的Taq Antibody和1μg的Supercoiled pBR322 DNA在37℃或70℃下反应1小时，DNA的电泳谱带不发生变化。
3. 10 U的Taq Antibody和1μg的λDNA在37℃或70℃下反应1小时，DNA的电泳谱带不发生变化。
4. 10 U的Taq Antibody和1μg的16S，23S rRNA在37℃或70℃下反应1小时，RNA的电泳谱带不发生变化。
5. 35Cycles的PCR反应条件下，无Mouse Genomic DNA的污染。

名称：dNTP套装(100mM)
货号：YT389
规格：4×50μl
本品为独立包装的dATP、dCTP、dGTP和dTTP共4种溶液套装，每种的浓度均为100mM，适合用于PCR、real-time PCR、RT-PCR、cDNA或普通DNA合成、引物延伸反应、DNA测序、DNA标记等各种常规分子生物学反应。

本套装中的dATP、dCTP、dGTP和dTTP溶液均用超纯水配制，并用高纯度NaOH溶液调节pH值至7.0，浓度为100mM，即100mmol/L。
本套装中的dATP、dCTP、dGTP和dTTP溶液不含DNase、RNase、phosphatase和蛋白酶。
本套装中的dATP、dCTP、dGTP和dTTP溶液经测试，可以直接用于PCR等各种常规分子生物学反应。

储存条件：-20℃。

名称：热启动Taq PCR MasterMix
货号：ALH249
规格：0.5ml|5ml
本产品包含HotMaster Taq DNA聚合酶、dNTPs、MgCl2、反应缓冲液，浓度为2×。具有快速简便、灵敏度高、特异性强、稳定性好等优点，可zuì大限度的减少人为误差。HotMaster Taq DNA polymerase 采用了国际上zuì新独特的合成亲和性配体技术，该配体可以以一种温度依赖性的方式来可逆性地阻断酶的活性。该酶与一般Hot-start 酶不同之处在于，一般的Hot-start 酶只在第一步温度升高之前封闭酶的活性，而HotMaster Taq DNA 聚合酶利用抑制性配体通过温度调节方式封闭HotMasterTaq DNA 聚合酶的底物结合位点，温度低于40℃时，形成非活性的酶-抑制剂复合物，当温度升高至引物特异性的退火温度时，结合平衡向模板-特异性引物复合物形成方向移动，因此zuì大限度的减少PCR 扩增全程中的非特异性扩增产物产生，大大提高了PCR 反应的精确性。本产品使用方便快捷，能避免 PCR 操作过程中的污染，使用时只需取适量2×HotMaster Taq PCR MasterMix溶液，加入模板和引物，并加入去离子水补足体积，使MasterMix溶液浓度为1×即可进行反应。使用前请保证充分溶解并混匀。

产品组份：HotMaster Taq DNA Polymerase：0.05units/μl ；MgCl2： 4mM ；dNTPs (dATP, dCTP, dGTP, dTTP)：0.4mM；稳定剂；增强剂。

储存条件：-20℃。

名称：高保真平末端pfu DNA聚合酶
货号：RFT101
规格：100U(40μl)|5×100U(5×40μl)
本品是嗜热古细菌来源的DNA聚合酶，该酶除具有5’-3’DNA聚合酶活性外，还具有很强的3’-5’外切酶活性，增强了PCR扩增的保真度。与Taq酶相比，pfu聚合酶热稳定性更好，更能忍耐较高的变性温度。Pfu的保真性是Taq DNA聚合酶的10-15倍。延伸速度为0.5kb/分钟。PCR产物3’端不带碱基A，为平滑末端，要通过平滑末端克隆法进行克隆。适用于高保真的DNA片段的扩增、DNA片段的平滑化。

试剂盒组成：
pfu DNA Polymerase(2.5U/μl)-————————40μl
10×pfu PCR buffer(含Mg2＋)—————————1ml

活性定义：1单位(U) pfu DNA Polymerase活力定义为在74℃、30分钟内，以活性化的大马哈鱼精子DNA作为模板/引物，将10 nmol脱氧核苷酸掺入到酸不溶物质所需的酶量。

贮存液：50 mM Tris-HCl (pH 8.0); 0.1 mM EDTA; 1 mM DTT; 50 mM KCl ; Stabilizers; 50% glycerol

使用方法：
1、按照下表在0.2ml PCR管中制备反应体系：

成分	20μl反应体系	50μl反应体系	终浓度
Template	0.04-0.2 μg	0.1-0.5 μg	as you wish
Primer 1(10μM)	0.4μl	1μl	0.2μM
Primer 2(10μM)	0.4μl	1μl	0.2μM
10×pfu PCR buffer(含Mg2+)	2μl	5μl	1×
dNTP Mixture(10 mM)	0.4μl	1μl	200μM each
pfu (2.5 U/μl)	0.4μl	1μl	0.05U/μl
ddH2O	up to 20μl	up to 50μl	-

注1：如果需要改变Mg2+浓度，根据下表调节

PCR反应体系中Mg2+终浓度	2 mM	2.5 mM	3 mM	4 mM
20μl反应体系中25 mM MgSO4加入量	0μl	0.4μl	0.8μl	1.6μl
50μl反应体系中25 mM MgSO4加入量	0μl	1μl	2μl	4μl

注2：配制反应液时，请zuì后加入pfu，因为本酶有很强的3’-5’外切酶活性，有可能降解引物。
2、混匀后，离心快甩将反应液收集到管底。
3、PCR仪如果没有热盖加热的话，补加25μl矿物油。
4、PCR仪上执行以下程序：

步骤	温度	时间	循环数
初始变性	94℃	3-5 min	1
变性	94℃	30 sec	25-40*
退火	50-60℃*	30 sec
延伸	72℃	0.5kb/min*
zuì后延伸	72℃	5 min	1

注：PCR 反应条件视模板、引物等的结构条件不同而各异。在实际操作中需根据模板、目的片段的大小、碱基序列和引物的长短等具体情况，设定zuì佳的反应条件(温度、时间等)。

注意事项：
1、pfu 酶具有 3’-5’的外切酶活性，所以 pfu 酶扩增时延伸速度远比 Taq 酶低，应根据扩增产物的长度设置相应的延伸时间，一般情况下 pfu 酶的延伸速度为每分钟 0.5kb；同时 pfu 酶的 3’-5’的外切酶活性可能降解引物，所以应zuì后把pfu 酶到反应体系中，并立即进行 PCR 反应。
2、pfu 酶的热稳定性比 Taq 酶好，对于 GC 含量很高的模板，变性温度可以提高到98℃，对 pfu 酶的活性无影响。

储存条件：-20℃，有效期一年。