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- 康朗生物
- KL-A011
- 国产/进口
- 2025年07月13日
企业认证
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- 详细信息
- 文献和实验
- 技术资料
- 库存：
86
- 英文名：
Fluorescent PCR detection kit for Bacillus cereus
- 保质期：
-18℃以下，有效期6个月
- 供应商：
上海康朗生物科技有限公司
- 保存条件：
-18℃以下，有效期6个月
- 规格：
48次/盒
一、简介：
本试剂盒用一对蜡样芽胞杆菌特异性引物，结合一条特异性探针，用荧光PCR技术对蜡样芽胞杆菌的核酸进行体外扩增检测，用于临床上对可疑感染者的病原学诊断。
二、蜡样芽孢杆菌单重荧光PCR检测试剂盒用途：
本试剂盒适用于检测水样粪便、疑似污染的水、食物等样本中的蜡样芽胞杆菌(BC)，用于蜡样芽胞杆菌(BC)感染的辅助诊断，其检测结果仅供参考。
三、试剂盒组成：(48T)
组份 数量 规格
BC反应液(BC-qPCR MIX) 1管 672μL/管
核酸提取液(DNA Extraction) 2管 1.5mL/管
酶混合物(Enzymes MIX) 1管 48μL/管
阴性对照(NTC) 1管 50μL/管
BC阳性对照(BC-PTC) 1管 50μL/管
四、蜡样芽孢杆菌单重荧光PCR检测试剂盒储存条件及有效期：
本试剂盒于-20℃以下保存，有效期为12个月。
五、荧光PCR仪器适用范围：
ABI系列，Roche系列等荧光定量PCR检测仪等。
六、样品的采集与DNA提取
6.1 样品的采集
水样便取0.5-1mL；疑似污染的食物取1g。
6.2 样品前处理
水样便13000 rpm离心 2min，去尽上清；疑似污染的食物用手术剪剪碎混匀后取0.05g于研磨器中研磨，加入1.5mL生理盐水后继续研磨，待匀浆后转至 1.5mL灭菌离心管中，8000rpm 离心 2min，取上清液 100µL于1.5mL灭菌离心管中；疑似污染的水直接取100µL。
6.3 DNA提取
可采用PCR试剂盒配备的DNA抽提液，按以下说明进行DNA核酸的粗提。也可采购生产的DNA提取试剂盒(过柱法-荧光配套)或其他合适的商业化产品，并按照相应试剂盒说明进行操作。
对上述处理好的样本加入等体积核酸提取液(固体标本加入50μL核酸提取液)，100℃恒温处理10min，13000rpm离心5min，取上清液转移至新的1.5mL EP管，-20℃保存；
注：阳性对照和阴性对照为已经抽提好的核酸(无需提取)，直接取5µL加入到反应体系中即可。由于阳性对照浓度较高，建议最后在样品制备区域加入阳性对照。
七、蜡样芽孢杆菌单重荧光PCR检测试剂盒检测步骤
7.1 试剂的准备
从试剂盒中取出荧光PCR反应液(BC-qPCR MIX)、酶混合物(Enzymes MIX)，冰上融化并振荡混匀后，10000rpm离心10s。
设所需要的PCR反应管管数为N(N=样本数+1管阴性对照+1管阳性对照)，每个测试反应体系配制如下表：
试剂 每个反应加入的量 N个反应加入的量
荧光PCR反应液 14µL N×14µL
酶混合物 1 µL N×1 µL
总量 15 µL N×15µL
（1） 计算好各试剂的使用量，加入一适当体积洁净离心管中，充分混匀，10000rpm离心10s，向设定的N个PCR反应管中分别加入15μL荧光PCR反应液，向每管中加入处理后样品或阴性对照(NTC)和阳性对照(BC-PTC)5μL，10000rpm瞬时离心10秒。
7.2 qPCR反应条件
将各反应管放入定量PCR仪器的反应槽内。
推荐循环条件:
1循环 50℃ for 2 min
预变性 1循环 95℃ for 10 min
PCR扩增 40循环 95℃ for 15 sec
60℃ for 60 sec
在60℃延伸时收集荧光信号。报告基团：设置为FAM。淬灭基团：NONE，请勿选择ROX参比荧光。
八、结果分析
8.1 结果分析条件设定
直接读取检测结果。基线和阈值设定原则根据仪器噪声情况进行调整，以阈值线刚好超过正常阴性样品扩增曲线的最高点为准。
8.2 试验成立判定
（1） 阴性对照(NTC)：不应产生任何的扩增曲线。
（2） 阳性对照(BC-PTC)：均产生扩增曲线。
（3） 以上条件应同时满足，否则，此次试验视为无效。
8.3 结果判定
（2） 在试验成立的条件下，Ct值≤35，且曲线有明显的指数增长曲线，表明BC核酸阳性。
（3） Ct值显示为无的样本为阴性样本，表明BC核酸阴性。
（4） 如果Ct值>35，判为可疑样品。对于可疑样品，先看扩增曲线。如果扩增曲线为对数扩增曲线，则为可疑阳性，否则判为阴性。
（5） 对于可疑阳性样品，重新抽提核酸，再次进行BC 检测。如果重复扩增曲线为对数扩增曲线，判为样本阳性，表明BC核酸阳性；否则判为样本阴性。
九、注意事项：
（1） 初次使用前请仔细阅读说明书。并严格按照说明书步骤操作。
（2） 所有使用的离心管最好高压灭菌，而且必须不含DNA酶。
（3） PCR操作应严格按照要求分区(试剂配制区、标本处理区、PCR扩增区等)，防止实验室污染。
（4） 样本提取、试剂配置、加样需在不同区的超净工作台进行，以免污染。
（5） 试剂盒里所有物品应视为污染物对待，并按照卫生部《微生物生物医学实验室生物安全通则》进行处理。
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