5′ 去腺苷化酶

特别提示：包括5′ 去腺苷化酶在内，本公司的所有产品仅可用于科研实验，严禁用于临床医疗及其他非科研用途！

产品名称：5′ 去腺苷化酶
产品货号：SV1372
产品规格：1KU

特性:
DNA 和 RNA 5´ 末端的去腺苷化
Aprataxin 依赖的 DNA 修复检测
分析双核苷四磷*(代"酸")
概述:
酵母 5´ 去腺苷化酶是组氨酸三聚体（HIT）家族中的一员，属于组氨酸三聚体核苷结合蛋白（Hint ）的分支。它是 aprataxin 在酵母中的直系同源物。人 aprataxin 的突变会导致神经系统疾病，如共济失调性动眼神经失用症。通过从 DNA 的 5´ 末端去除 AMP（AMP-DNA 水解酶活性），人源 5´ 去腺苷化酶可以去除未连接中间体，它还可以通过去除 3´ -磷酸和 3´ -磷酸乙醇酸修复 DNA 的 3´ 末端损伤。人 aprataxin 作用于小分子，如核苷多磷酸双腺苷四磷*(代"酸")（AppppA）和 lysyl-AMP。
5´ 去腺苷化酶是由酿酒酵母（S. cerevisiae）的 HNT3 基因编码。我公司研究显示该蛋白能从 DNA 和 RNA 的 5´ 末端去腺苷化，余下 5´ 末端磷酸。它也能切割 AppppA 生成 ATP 和 AMP。未见其对 lysyl-AMP有任何作用。
来源:
从携带编码酿酒酵母 5´ 去腺苷化酶质粒的 E. coli 菌株中纯化而得。
反应条件:
20 μl 反应体系:1X BalbBuffer 2
[50 mM NaCl，10 mM Tris-HCl，10 mM MgCl2，1 mM DTT (pH 7.9 @ 25℃) ]，5–50 pmol 腺苷化 DNA (AMPDNA)，30℃ 温育。
热失活:70℃ 20 分钟。
单位定义:
1 单位指 30℃ 条件下，10 分钟从 5´ 腺苷化 DNA 寡聚体中去除 10 pmol AMP 所需的酶量。
浓度:
20,000 units/ml。

除了5′ 去腺苷化酶,，我公司还供应以下相关产品：



名称：辣根过氧化物酶(偶联级)
货号：BTN131125
规格：100mg
HRP是一种分子量达44000的糖蛋白，由无色的酶蛋白和深棕色的铁卟啉结合而成，中性糖和氨基糖约占18％，主要有甘露糖、木糖、阿拉伯糖和己糖胺等。每一个HRP分子中含一个氯化血红素IX作辅基，该辅基在403nm 波长处有最大吸收峰，而去辅基的酶蛋白在275nm波长处有最大吸收。HRP在403nm的OD值与275nm的OD值之比，也就是所谓的RZ(Reinheits Zahl)值。RZ值仅说明血红素基团在HRP中的含量，并非表示HRP制剂的真正纯度，而且RZ值高的HRP制剂，并不意味着酶活性也高。但可以以纯酶溶液在10mm光径403nm波长下的吸光度来计算酶浓度[1％(W/V)酶溶液吸光度为22.5，浓度为227umol/L]。HRP对热及有机溶剂的作用比较稳定，用甲*与石蜡切片处理或用纯乙醇或l0％甲醛水溶液固定做冷冻切片，均不能使其活性改变。*化物或硫化物在10⁻⁵～10⁻⁶mol/L浓度时具有可逆性地抑制HRP的作用；氟化物、叠氮化合物或羟胺仅在高于10⁻³mol/L浓度时抑制HRP；HRP还可被羟甲基过氧化氢不可逆地抑制。强酸也是HRP的强烈的抑制剂。


产品特点：
1．易于提取，价格相对低廉。
2．性质稳定，耐热及有机溶剂的作用，与抗原或抗体偶联后，活性很少受损失。

储存条件：低温运输，-20℃保存，有效期一年。

名称：SpeI-HF限制性内切酶
货号：SV0715
规格：2500U|2500U|500U|250U
在不同反应缓冲液的活性:
BalbBuffer 1.1: 25%
BalbBuffer 2.1: 50%
BalbBuffer 3.1: <10%
CutSmart Buffer: 100%
特性:
CutSmart、重组酶、基因工程改造酶、省时酶、高保真酶。
反应条件:
CutSmart 缓冲液，37℃。
热失活:80℃ 20 分钟。
浓度:
20,000units/ml。
甲基化敏感性:
对 dam、dcm 和哺乳动物 CpG 甲基化均不敏感。
注意事项:
该酶切割产生 5´ CTAG的突出端，能有效地和 Avrll、Nhel 或 Xbal 切割产生的 DNA 片段连接。

名称：热稳定无机焦磷酸酶
货号：SV1054
规格：1250U|250U
特性:
增强 DNA 复制
概述:
无机焦磷酸酶（PPase）催化无机焦磷酸盐水解生成正磷*(代"酸")盐。
P207–4 + H20 → 2HP04–2
来源:
重组 E. coli 菌株，携带从极度耐热的 Thermococus litoralis 中克隆的无机焦磷酸酶基因。
单位定义:
1 单位指标准反应条件:下 [0.5 ml 反应体系，50 mM Tricine（pH 8.5），1 mM MgCl2 和 0.32 mM PPi，75℃ 反应 10 分钟]，每分钟催化无机焦磷酸盐生成 1 μmol 磷酸盐的酶量。
浓度:
2,000 units/ml。

名称：β葡糖基转移酶(T4噬菌体)
货号：JN0074
规格：500U
  本品能特异性地将尿嘧啶二磷酸葡萄糖(UDP-Glc)的葡萄糖单元转移至双链DNA的5-羟甲基胞嘧啶残基上，形成β-葡糖基-5-羟甲基胞嘧啶。T4噬菌体beta葡萄糖转移酶通过克隆了T4噬菌体bgt基因的重组大肠杆菌获得。
  本品对5-hmC残基的定向修饰来区分5-mC和5-hmC。这种酶可以将所有5-hmC糖基化，产生5-ghmC。这个反应是序 列无关的，因此所有5-hmC都将糖基化，而C或5-mC则不受影响。

产品用途：
1、糖基化DNA中5-羟甲基胞嘧啶。
2、免疫检测DNA中5-羟甲基胞嘧啶。
3、通过与[3H]或[14C]-UDP-葡萄糖一起孵育将[3H]或[14C]-葡萄糖掺入到含有5-羟甲基胞嘧啶的DNA受体中，对5-羟甲基胞嘧啶残基标记。
4、通过核酸内切酶保护分析检测DNA中的5-羟甲基胞嘧啶。

基因组DNA中5-羟甲基胞嘧啶分析：

方案一
第1步：糖基化
基因组DNA用T4-BGT处理，让所有5-hmC糖基化，产生5-ghmC。这个反应是序列无关的，因此所有5-hmC都 将糖基化，未修饰或5-mC DNA则不受影响。
第2步：限制性内切酶消化
MspI和HpaII识别相同的序列（CCGG），但是对不同的甲基化状态敏感。HpaII只切割完全未修饰的位 点，胞嘧啶上的任何修饰（5-mC、5-hmC或5-ghmC）都阻碍切割。MspI则识别并切割5-mC和5-hmC，5-ghmC除外。
第3步：PCR分析
用引物扩增实验的靶DNA和对照的靶DNA。如果CpG位点含有5-羟甲基胞嘧啶，那么糖基化和消化之后检测 到条带，但是未糖基化的对照反应中没有。如果使用实时定量PCR，那么就可以估计这个位点大概有多少 羟甲基胞嘧啶。

方案二
TAB-Seq*


质量保证：经多次柱纯化，SDS-PAGE胶检测仅可见清晰单一的目的条带；PCR方法检测无大肠杆菌DNA残留，无核酸内、外切酶污染。

活性定义：1 单位指能够保护 0.5 μg T4 bgt-DNA 免受 MfeI 限制性内切酶切割所需要的酶量。

10×反应缓冲液：50 mM Potassium Acetate，20 mM Tris- acetate，10 mM Magnesium Acetate，1 mM DTT， pH 7.9 at 25℃

贮存缓冲液：20 mM KPO4，200 mM NaCl，0.25 mM DTT，0.1 mM EDTA，50% Glycerol，pH 7.0 at 25℃

热失活：65℃，20分钟。