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- 百奥莱博
- MQ0012-HTQ
- 北京
- 2025年07月15日
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- 详细信息
- 文献和实验
- 技术资料
- 库存：
115
- 英文名：
Stbl3 Chemically Competent Cell
- 保质期：
长期
- 供应商：
北京百奥莱博科技有限公司
- 保存条件：
-80℃
- 规格：
10×100μl/50×100μl
特别提示：包括Stbl3化学感受态细胞在内，本公司的所有产品仅可用于科研实验，严禁用于临床医疗及其他非科研用途！
产品名称：Stbl3化学感受态细胞
英文名称：Stbl3 Chemically Competent Cell
产品货号：MQ0012
产品规格：10×100μl/50×100μl
Stbl3菌株来源于HB101 E.coli strain，是慢病毒载体系统推荐使用的菌株。
基因组含有重组酶recA13突变，可有效抑制长片段末端重复区的重组，降低错误重组的概率；但不含核酸酶endA1突变，体内核酸酶含量较高，提取质粒时务必使用质粒提取试剂盒中去蛋白液。
此菌株具有链霉素抗性，不存在lacIqZΔM15，不可用于蓝、白斑筛选。Stbl3感受态细胞经特殊工艺制作，经pUC19检测转化效率>108cfu/μg DNA。
保存条件：-80℃
基因型：
F-mcrB mrr hsdS20(rB-，mB-)recA13 supE44 ara-14 galK2 lacY1 proA2 rpsL20(StrR)xyl-5λ-leu mtl-1 endA1+
操作说明：
1.Stbl3感受态细胞放置冰中融化(或放手心或室温片刻，待菌体处于冰水混合状态时迅速插入冰中)，加入目的DNA(质粒或连接产物)并用手拨打EP管底轻轻混匀，冰上静置25分钟。
2.42℃水浴热激45秒，迅速放回冰上并静置2分钟，晃动会降低转化效率。
3.向离心管中加入0.9 mL室温S.O.C.培养基，使用其他培养基会降低转化效率。
4.30℃，225 rpm复苏90分钟。(当质粒中含有不稳定片段时，30℃培养可降低错误重组的概率，若转化control PUC19计算转化效率，则需37℃，225 rpm复苏60分钟。)
5.5000rpm离心一分钟收菌，留取100μl左右上清轻轻吹打重悬菌块并涂布到含相应抗生素的S.O.C.培养基上。
6.将平板倒置放于30℃培养箱过夜培养。(若转化control PUC19计算转化效率，则需37℃培养过夜)
注意事项：
1.感受态细胞zuì好在冰上融化。
2.混入质粒或连接产物时应轻柔操作。
3.转化高浓度的质粒或高效率的连接产物可相应减少zuì终用于涂板的菌量。
除了Stbl3化学感受态细胞,，我公司还供应以下相关产品：
BTN51104 B载体 2μg
BTN130511 大肠杆菌JM110化学感受态细胞 10*100μl
YT006 RNase A (100mg/ml)(不含DNase) 0.5ml
YT022 感受态细胞快速制备试剂盒 200次
SY0015 BL21 (DE3) pLysS化学感受态细胞 100μl×10管
JN0108 pBalbTrx-Tev质粒 20次(1μg)
MQ0037 BL21(DE3)化学感受态细胞 10×100μl/50×100μl
MQ0043 Rosetta(DE3)化学感受态细胞 10×100μl/50×100μl
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GL2285 DH5α受体菌 1ml
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文献和实验短片段（5kb 以内）的序列克隆成功率。对于提高大片段克隆的成功率，可以从以下几方面考虑： ①选择合适的克隆载体，例如 pCC1-Brick 等适合装载大片段的载体； ②选择合适的克隆方法，通常无缝克隆技术如 Gibson 组装或者 Golden Gate 克隆对于大片段的组装效率更高； ③选择合适的纯化方式，纯化目的基因片段和线性化载体片段后再使用，并且注意两者的使用比例； ④选择合适的大肠杆菌感受态细胞，例如 stbl3，JM109 等； ⑤挑选单克隆菌落时需要注意，成功重组大片段的阳性单克
系列）：高拷贝会导致大片段质粒复制压力大，易丢失或断裂，优先用低拷贝载体（如 pACYC184，拷贝数 10-15）或大片段专用载体（如 BAC 载体 pBeloBAC11，可容纳 100kb 以上片段，在大肠杆菌中稳定存在）； ④选择合适的连接方法，比如 Gibson 组装（无缝克隆）的方法更适合 10-20kb 大片段的连接，相比传统的 T4 连接的方法，成功率更高，操作更简便； ⑤选择重组缺陷型感受态，提高大质粒的转化效率，如 Stbl3、DH10B 等，此外转化方式也会影响转化
法、 CaCl2、 RuCl等化学试剂法感受态细胞：处理后，细胞膜的通透性发生变化，成为能容许外源 DNA 分子通过时细胞的状态。转化细胞(转化子)：带有异源 DNA 分子的受体细胞( Transformant )。本实验以 E.coli DH5α 菌株为受体细胞，用 CaCl2 处理受体菌使其处于为感受态，然后与 pUC18质粒共保温，实现转化。 pUC18质粒携带有抗氨苄青霉素的基因，因而使接受了该质粒的受体菌具有抗氨苄青霉的特性，用 Apr符号表示。将经过转化后的全部受体细胞经过适应稀释，在含氨
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