FITC 异硫氰酸荧光素

FITC（Fluorescein Isothiocyanate），中文常称为异硫氰酸荧光素，是生物医学研究中一种应用极为广泛的经典绿色荧光探针和标记试剂。

• 中文名称：异硫氰酸荧光素
• 英文名称：Fluorescein Isothiocyanate（简称 FITC）
• CAS 号：3326-32-7（异构体I）或 27072-45-3（异构体I和II的混合物）
• 分子式与分子量：C₂₁H₁₁NO₅S，389.4 g/mol
• 外观性状：通常为橙色或黄橙色粉末。
• 溶解性：易溶于 DMSO、DMF 等有机溶剂，微溶于水。通常需先溶于有机溶剂后再稀释于水或缓冲液中。
• 储存条件：对光敏感，强光下易发生光漂白，必须密封、避光、防潮，通常储存在 -20 °C 的低温环境中。

光谱与荧光特性

• 激发与发射波长：其最大激发波长（Ex）约为 490 nm - 495 nm，最大发射波长（Em）约为 517 nm - 525 nm，能发出明亮的黄绿色荧光。
• 高荧光量子产率：FITC 具有较高的荧光量子产率（约 0.9），信号明亮，非常适合多种荧光显微镜、流式细胞仪和荧光板检测设备。
• 反应特异性：其分子结构中的异硫氰酸酯基团（–N=C=S）能在碱性缓冲液（pH 8.0-9.0）中，与蛋白质、多肽等生物分子上的游离氨基（如赖氨酸残基）发生反应，形成稳定的流脲共价键。
• 局限性：光稳定性相对较差，长时间光照易发生荧光淬灭；此外，其荧光特性具有 pH 敏感性（pKa=6.4），在酸性环境中荧光强度会显著衰减。

主要应用

• 蛋白质与抗体标记：广泛用于免疫荧光染色（IF）、流式细胞术（FACS）、ELISA 和 Western 印迹等实验中，标记一抗或二抗，用于研究蛋白质构象、动力学及抗原定位。
• 核酸探针标记：用于标记 DNA 或 RNA 探针（如 FISH 荧光原位杂交、qPCR 探针），检测染色体异常或进行快速核酸检测。
• 纳米载体与细胞示踪：常用于标记纳米颗粒（如介孔二氧化硅、聚合物胶束、脂质体）或细胞，实时追踪其在细胞内的摄取、定位、释放及转运行为。
• 多重染色组合：常与发射红光的染料（如 TRITC、Texas Red）或发射蓝光的染料（如 DAPI）联合使用，实现多通道检测和成像。