KAPA HiFi高保真甲基化文库扩增试剂

盘点 PCR 的七大应用领域

为尿嘧啶。设计两个引物对（甲基化和未甲基化），从而根据重亚硫酸盐处理 DNA 的扩增结果来区分目标位点的甲基化状态[7,8]。 甲基化研究中所使用的 DNA 聚合酶除了能够扩增富含AT的序列，还必须能够读取识别重亚硫酸盐处理后 DNA 中的 U 残基。而高保真 DNA 聚合酶含有来自于古细菌起源的尿嘧啶结合域，所以不适用于 MSP（除非经过特殊修饰）。 实时 PCR 可代替终点 PCR，为 MSP 提供更准确的甲基化定量分析。利用实时 PCR，对 PCR 扩增子的熔解曲线分析是检测目标位点甲基化状态

科研锦鲤，你准备好了吗？

结果并非如此。如果大家需要使用热启动酶，建议向厂商索取的检测数据（如分子信标法检测，Ma et al., Anal Biochem, 2006），以证明其确实具有热启能力。2. 保真性保真性就是扩增过程中的错配率，对于 cDNA 克隆、文库构建的老师来说是尤为重要的参数。Taq 酶的保真性较低，而 Pfu、HiFi 等高保真酶具有 3’-5’ proofreading 功能，可以校正错配，保真度较高。保真性高于 Taq 酶 50 倍左右是比较常见的数值。我们也可以用 Lac I 分析的经典方法自己检测一下

这几类 PCR 技术你知道吗？

的特异性。因为，对于使用基因特异性引物（GSP）进行 cDNA 合成时，较高的反应温度允许使用 Tm 值较高的基因特异性引物。 Taq 酶：普通的 Taq 酶扩增能力很强但是错配率高，虽然高产但是最大只能 扩增 3-5kb 的片段；而本身带有校读功能的高保真酶有很高的保真度，不易出错，可扩增较长的片段，但是产量偏低。TripleMaster 酶则是一个高保真的混合酶—在保留 Taq 酶的高聚合能力，保证高产的同时，还有效降低了 Taq 的错配率，大大提高了保真性。 RT-PCR buffer