RNA/单链DNA染料(SYBR Green)

特别提示：包括RNA/单链DNA染料(SYBR Green)在内，本公司的所有产品仅可用于科研实验，严禁用于临床医疗及其他非科研用途！

产品名称：RNA/单链DNA染料(SYBR Green)
英文名称：SYBR Green II
产品货号：JN0061
产品规格：500μl

  本品是一种高敏感的核酸染色试剂，可以对RNA或者是单链的DNA进行染色。使用300nm透射光显影的情况下，非变性凝胶中检测核酸的灵敏度可以达到5×10-7克。与传统的EB染料相比，SYBR Green II RNA染料的灵敏度更高，可以应用于杂交前RNA质量的检测，同时不会影响后续的转膜，还可应用于变性梯度凝胶电泳（DGGE）和单链构象多态性分析（SSCP）等实验。
本品可以代替银染和EB染色，消除了银染复杂、费时的缺点；与EB染色相比，形成的SYBR Green II -RNA复合物所激发的荧光是EB-RNA复合物激发荧光的7倍。SYBR Green II RNA染料并不是特异性的结合RNA或者DNA单链，但是其对单链的结合效率是双链的约2倍，可广泛应用于RNA的质量分析。

产品特点：
1、高灵敏：至少可检出20pg ssDNA或RNA，高于EB染色法25-100倍。
2、信噪比高：样品荧光信号强，背景信号低。
3、操作简单：无须脱色或冲洗。
4、适用范围广：可适用于多种电泳分析。
5、使用方便：不影响其它修饰酶作用。
6、经济：价格比银染便宜。

使用建议：
胶染法(推荐方法)：
制胶时加入SYBR Green II核酸染料。待胶冷却至50℃左右，每100ml胶中加入3～5μl SYBR Green II核酸染料。
按照常规方法进行电泳即可。
注：
(1)用此方法染色可以准确确定核酸片段分子量。染料用量相对较少，1ml染料大约可以做300块100ml的胶。
(2)由于SYBR Green II热稳定性较差，不能在热的胶溶液中直接添加，需要等待溶液冷却至50℃左右才能添加。摇晃，振荡或者翻转以保证染料充分混匀。
泡染法：
按照常规方法进行电泳。
用pH7.0～8.5的缓冲液(如：TAE，TBE或TE)，按照10000﹕1 的比例稀释SYBR Green II浓缩液，混匀后制成染色溶液。
将染色溶液倒入合适的聚*烯容器中，放入凝胶，用铝箔等盖住容器使染料避光，室温振荡染色10～30 分钟，染色时间因凝胶浓度和厚度而定。聚*烯酰胺凝胶直接在玻璃平皿上染色，将配好的稀释溶液轻轻地倒在胶板上，让稀释液均匀地覆盖整个胶板，并染色30分钟。玻璃平皿必须预先经过*烷化溶液处理(避免染料吸附在玻璃表面上)。
注：此方法可以精确确定核酸片段分子量，但染料用量较多。

储存条件：-20℃

除了RNA/单链DNA染料(SYBR Green),，我公司还供应以下相关产品：



名称：即用型荧光定量PCR试剂盒
货号：BTN90408
规格：1mL
本产品是基于荧光染料检测的即用型PCR试剂盒，可以对靶片段进行实时定量PCR分析。产品含有经过优化的缓冲液组分、Taq DNA聚合酶、dNTPs、MgCl2及新型荧光染料DNAgreen等所有实时定量PCR所需要的成分，用户只需加入模板和引物即可进行实时定量PCR反应和HRM分析，具有广泛的用途。

产品特点：
1. 方便，用户只需准备模板和引物既可以进行实时定量PCR实验和HRM(High Resolution DNA Melt Curve Analysis)分析。而基于SYBR Green I和LC Green染料的qPCR mix则不能同时用于上述两种实验。
2. 使用第三代饱和型荧光染料，信号强，不会抑制PCR反应。
3.快捷，即用型的预配液使加样操作步骤大大简化，避免了交叉污染，降低实验误差。
4. 各成分的浓度和比例都经过精心优化，反应的灵敏度高，特异性强。能检测到浓度为50拷贝/mL的靶分子。

试剂盒组成：

成分	规格
Taq DNA聚合酶(5U/μL)	100μl
易错PCR Mix，10×	300μl
易错PCR专用dNTP，10×	300μl
MnCl2，5mM	300μl
说明书	1份

储存条件：低温运输，-20℃保存，保存期限为6个月。

使用方法：

1.以20μl的qPCR反应体系为例：在一干净的PCR管中，加入下列成分：

反应体系成分	20μl体系	终浓度
qPCR MagicMix，2×	10μl	1×
自备引物一	xμl	0.1-0.5μM
自备引物二	xμl	0.1-0.5μM
自备模板	xμl
自备ROX	2μl	(可以不加)
补超纯水到	20μl

放入荧光PCR仪中进行扩增，并在退火或延长步骤中记录荧光信号。
注意：
a)通常引物浓度以0.2μm可得到较好结果，可以终浓度0.1-1.0μm作为设定范围的参考；通常DNA模板的量以10-100 ng基因组DNA或1-10 ng cDNA为参照，因不同物种的模板中含有的目的基因拷贝数不同，可对模板进行梯度稀释，以确定最佳的模板使用量。
b)ROX 校正染料：如果使用ABI公司的7500，7700和7900三种型号的荧光PCR仪器，则需用自备的ROX进行Ct值校正。对ABI 7700和7900，ROX的最佳浓度为1×(即在每20μl反应体系中加2μl 10×ROX)。对ABI 7500，ROX的最佳浓度为0.05-0.1×(每20μl反应体系加0.1-0.2μl 10×ROX；也可将10×ROX稀释到1×，然后每个反应体系加入1-2μl 1×ROX)。ROX会在溶解曲线中产生噪音，因此，如果出现了杂峰，将软件中“Passive Reference Dye”中的“ROX”选项取消打勾，然后重新分析数据。
对于iCycler IQ，MJ Opticon，MJ Chromo4，MX3000，MX4000，RotorGene3000，RotorGene 6000和LightCycler 480等型号的荧光PCR仪器，ROX不是必须的，但加入的话也不会影响整个PCR分析。

2. 循环步骤：根据扩增子的性质和仪器性能，从以下三个过程中任选一个进行扩增。
两步快速循环法：适用于引物Tm值设计为60℃的反应

循环步骤	温度	时间	循环数
酶活化	95℃	10min	1
变性	95℃	15s	35-40
退火&延伸	60℃	1min

注意：本产品所采用的热启动酶须在预变性95℃、10 min条件下实现酶的活化。退火温度请以60-64℃作为设定范围的参考，发生非特异性反应时，可提高退火温度。
三步快速循环法：适用于延伸步骤温度高于退火步骤的PCR(长引物PCR)

循环步骤	温度	时间	循环数
酶活化	95℃	10min	1
变性	95℃	10s	35-40
退火	56-64℃	30s
延伸	72℃	32s

注意：
·退火温度：建议采用两步法PCR，退火温度60℃进行反应。若提高反应特异性，可提高退火温度，以60-64℃作为设定范围的参考。若因使用Tm值较低的引物等原 因，得不到良好的实验结果时，可尝试进行三步法PCR扩增，三步法的退火温度请以56℃-64℃的范围作为设定参考。
·延伸温度：延伸温度设为72℃通常可以提高扩增效率。但是，对于AT含量大于70%的扩增子来说，延伸温度设为60℃为宜。
通用循环法：这种循环方法适用于几乎所有的荧光PCR仪，也适用于用快速循环法不能扩增的模版。

循环步骤	温度	时间	循环数
酶活化	96℃	10min	1
变性	96℃	15s	35-40
退火&延伸	60℃	1min

3. 数据采集
具体操作按所用仪器推荐的流程进行。本产品中所含的荧光染料在没结合DNA时，最大吸收光谱在471nm，结合DNA时的最大吸收光谱在500nm，最大发射光谱在530nm。

注意事项：
1. 如果使用iCycler，可以不加入FAM。
2. 如果使用Roche LightCycler的玻璃毛细管进行PCR，需加入终浓度为0.5mg/mL的自备BSA。