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- 详细信息
- 文献和实验
- 技术资料
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477
- 英文名:
2×Babuddy MasterMix(With Dye)
- 保质期:
长期
- 供应商:
北京百奥莱博科技有限公司
- 保存条件:
-20℃
特别声明:本产品及我公司所售其他产品均为科研类试剂产品,严禁用于药物、医疗及其他非科研用途。
北京现货2×Babuddy MasterMix(含染料)特价促销由专业试剂供应商北京百奥莱博提供,用于科研目的生化试验项目,本产品质量好,且极具价格优势,深为用户称道,了解更多2×Babuddy MasterMix(含染料)等核酸扩增(PCR)产品请联*(代"系")我司咨询订购。
名称:北京现货2×Babuddy MasterMix(含染料)特价促销
规格:1ml|5ml
产地:国产|进口
品牌:百奥莱博
英文名:2×Babuddy MasterMix(With Dye)
本品是由Babuddy Super Fidelity DNA Polymerase、PCRBuffer、Mg2+、dNTPs以及PCR稳定剂和增强剂组成的预混体系,浓度为2×。Babuddy Super Fidelity DNA Polymerase是一种快速、高扩增效率的高保真DNA聚合酶,具有5"-3"DNA聚合酶活性和3"-5"外切核酸酶活性。经过改造的聚合酶其活性区域融合有一段聚合增强结构域,独特的结构极大提升了保真性和延伸速度。Babuddy Super Fidelity DNA Polymerase的保真性是普通Taq DNA Polymerase的50倍,是普通Pfu的6倍。其延伸速率为15-30s/kb,成功克服了普通Pfu酶扩增效率低、扩增速度慢的缺陷,大大缩短了反应时间。
本品特别适合于在基因克隆实验中扩增长片段DNA,尤其在扩增>10 kb的DNA片段时,优势更加明显,所扩增的片段最长可达20 kb。预配好的PCR混合液使操作更加简单快捷,可最大限度地减少人为误差和污染。
使用本产品扩增得到的PCR产物的3"端不带有“A”碱基,可直接克隆于平末端载体中。如需进行T/A克隆,需在PCR产物末端添加“A”后进行克隆。本产品具有延伸速度快、扩增效率高、保真性强的特点。适用于基因克隆、基因定点突变、SNP等实验。本产品已加入染料(蓝色),反应结束后可直接进行电泳检测,无需再使用上样缓冲液。
产品特点:
1、高保真性:保真性是普通Taq DNA Polymerase的50倍,普通Pfu的6倍。
2、扩增速度快:其延伸速率为15-30sec/kb,成功克服了普通Pfu酶扩增效率低、扩增速度慢的缺陷。
3、特别适合于扩增长片段:扩增的片段长度可长达20kb。
产品组成:
| 组份 | 1ml | 5ml |
| 2×Babuddy MasterMix(With Dye) | 1ml | 5×1ml |
| ddH2O | 1ml | 5×1ml |
注意:2×Babuddy MasterMix含有Babuddy DNA Polymerase,2×PCR Buffer, 3 mM MgCl2和400μM dNTP mix。
使用方法:
以下举例为常规PCR反应体系和反应条件,实际操作中应根据模板、引物结构和目的片段大小不同进行相应的改进和优化。
1、PCR反应体系
| 试剂 | 20μl反应体系 | 50μl反应体系 | 终浓度 |
| 2×Babuddy MasterMix | 10μl | 25μl | 1× |
| Forward Primer,10μM | 1μl | 2.5μl | 0.5μM |
| Reverse Primer,10μM | 1μl | 2.5μl | 0.5μM |
| Template DNA | 适量 | 适量 | <250ng |
| ddH2O | up to 20μl | up to 50μl |
a.模板:在50μl PCR反应体系中,DNA模板的建议用量为低复杂度模板(如质粒DNA,λDNA等)1 pg- 10ng,高复杂模板(如基因组DNA)50-250ng。
b.引物:引物浓度请以终浓度0.2-1.0μM作为设定范围的参考,推荐终浓度为0.5μM。扩增效率不高的情况下,可提高引物的浓度;发生非特异性反应时,可降低引物浓度,由此优化反应体系。
2、PCR反应条件
常规三步法PCR反应:
| 步骤 | 温度 | 时间 | 循环数 |
| 预变性 | 98℃ | 30 s-3 min | |
| 变性 | 98℃ | 5-10 s | 25-35 个循环 |
| 退火 | 45-72℃ | 10-30 s | |
| 延伸 | 72℃ | 2-4 kb/min | |
| 终延伸 | 72℃ | 5-10 min |
a.变性:简单模板的预变性温度为98℃,预变性时间为30 s。对于比较复杂的模板,预变性时间可延长至3分钟。
b.退火:使用本产品时,退火温度设定的基本原则是,当引物长度小于或等于20 nt时,退火温度为引物最低的Tm;当引物长度大于20 nt时,退火温度应在最低Tm的基础上以Tm+3℃退火10-30 s。当无法得到理想的扩增效率时,应以最低的Tm值逐步提升至模板延伸温度。对于Tm高的引物可以使用两步法PCR。
c.延伸:本产品中所包含的Babuddy DNA Polymerase的扩增效率为2-4 kb/min,复杂性低的模板可用4 kb/min,复杂性高的基因组DNA模板,延伸时间则应为2 kb/min,对于一些cDNA模板,延伸时间可增加到1.5 kb/min。
d.循环次数:可根据扩增产物的下游应用设定循环数。如果循环次数太少,扩增量不足;如果循环次数太多,错配机率会增加,非特异性背景严重。所以,在保证产物得率的前提下,应尽量减少循环次数。
当引物的退火温度较高时,建议使用两步法进行PCR扩增:
| 步骤 | 温度 | 时间 | 循环数 |
| 预变性 | 98℃ | 30 s-3 min | |
| 变性 | 98℃ | 5-10 s | 25-35 个循环 |
| 延伸 | 72℃ | 2-4 kb/min | |
| 终延伸 | 72℃ | 5-10 min |
储存条件:-20℃,避免反复冻融。
更多有关北京现货2×Babuddy MasterMix(含染料)特价促销的价格及使用说明等,请联*(代"系")我们的业务经理王欣女士咨询,我公司还销*(代"售")以下产品:
·抗His标签抗体琼脂糖介质
编号:WE0330
英文名称:Anti-His Mouse Monoclonal Antibody Agarose
规格:100μl|500μl
抗His标签免疫亲和介质是将抗His标签的单克隆抗体共价偶联到琼脂糖上,这种琼脂糖能进行免疫沉淀或者免疫共沉淀,能检测包含有His标签的蛋白。
抗体类型:鼠单克隆抗体IgG1
免疫原:人工合成多肽序列
应用范围:IP
·超纯RNA提取试剂盒(DNase I)
编号:WE0193
英文名称:SuperPure RNA Extraction Kit(DNase I)
规格:50次
本试剂盒是基于TRIzon改进后的柱式总RNA提取试剂盒,本制品可以从动物组织、植物材料、各种微生物及培养细胞等样品中提取总RNA。首先裂解液充分裂解并匀质化样本,在特有的高盐状态下,RNA特异性地与硅基质结合,在极大程度减少了蛋白污染的同时有效去除了有机溶剂的污染,得到的RNA纯度更好,质量更高。本产品可从各细胞或组织中快速提取总RNA,每次可处理 30-50 mg组织或 5×106 细胞,可同时处理多个不同样品。如果是对微量DN非常敏感的RNA实验,残留的DNA可利用无RNase的DNase在柱上进行消化去除,提取后的RNA可直接应用于RT-PCR、Northern Blot、Dot Blot、体外翻译等实验。
试剂盒组成:
| 组份 | 50次 |
| DNase I | 1000 U |
| 10×Reaction Buffer | 1000μl |
| TRIzon Reagent | 60ml |
| Buffer RW1 | 40ml |
| Buffer RW2(浓缩液) | 11ml |
| RNase-Free Water | 10ml |
| 吸附柱RM及收集管 | 50套 |
| RNase-Free离心管(1.5ml) | 50个 |
保存条件:DNase I及10×Reaction Buffer -20℃保存,TRIzon Reagent 2~8℃避光保存,其它组分室温(15~30℃)。
自备试剂:*仿(新开封或提取RNA专用)、70%乙醇(无RNase水配制)、无水乙醇。
实验前准备及重要注意事项/strong>:
1、预防RNase污染,应注意以下几方面:
1)使用无RNase的塑料制品和枪头,避免交叉污染。
2)配制溶液应使用无RNase的水。
3)操作人员戴一次性口罩和手套,实验过程中要勤换手套。
2、样品应避免反复冻融,否则影响RNA提取得率和质量。
3、使用前若发现TRIzon Reagent有沉淀,可置于56℃水浴几分钟,即可溶解。
4、第一次使用前应按照试剂瓶标签说明在Buffer RW2中加入无水乙醇。
5、所有离心步骤若无特殊说明均在室温下进行,且所有操作步骤动作要迅速。
操作步骤:
1、样品处理
① 组织:30-50 mg组织在液氮中充分研磨后加入1ml TRIzon Reagent,或在组织样品中加入1ml TRIzon Reagent后匀浆处理。
注意:样品体积不超过TRIzon Reagent体积的10%。
② 单层培养细胞:吸去培养液,加入适量 ,每10cm2加入1ml TRIzon Reagent。
③ 细胞悬液:离心收集细胞。每5×106细胞加入1ml TRIzon Reagent。
2、样品中加入TRIzon Reagent后反复吹打几次,使样本充分裂解。室温放置5分钟,使蛋白核酸复合物完全分离。
3、以每1ml TRIzon Reagent加入200μl*仿的比例加入*仿,盖好管盖,剧烈振荡15秒,室温放置2分钟。
4、4℃ 12000rpm(~~13400×g)离心10分钟,此时样品分为三层:红色有机相,中间层和上层无色水相,RNA主要在上层水相中,将上层水相移到一个新的RNase-Free离心管(自备)中。
5、在得到的水相溶液中加入等体积的70%乙醇(无RNase水配制),颠倒混匀。
6、将上步所得溶液全部加入到已装入收集管的吸附柱中。若一次不能加完溶液,可分多次转入。12000rpm离心20秒,倒掉收集管中的废液,将吸附柱重新放回收集管中。
7、向吸附柱中加入350μl Buffer RW1,12000rpm离心20秒,倒掉收集管中的废液,将吸附柱重新放回收集管中。
8、配制DNase I 混合液:取52μl RNase-Free Water,向其中加入8μl 10×Reaction Buffer和20μl DNase I(1 U/μl),混匀, 配制成终体积为80μl的反应液。
9、向吸附柱中直接加入80μl DNase I 混合液,20-30℃孵育15分钟。
10、向吸附柱中加入350μl Buffer RW1,12000rpm离心1分钟,弃废液,将吸附柱重新放回收集管中。
11、向吸附柱中加入500μl Buffer RW2(使用前检查是否已加入无水乙醇),12000rpm离心20秒,倒掉收集管中的废液,将吸附柱重新放回收集管中。
12、重复步骤11。
13、12000rpm离心2 分钟,倒掉收集管中废液。将吸附柱置于室温数分钟,彻底晾干。
注意:这一步的目的是将吸附柱中残余的乙醇去除,乙醇的残留会影响后续的酶促反应(酶切、PCR 等)。
14、将吸附柱置于一个新的无RNase离心管中,向吸附柱的中间部位加入30-50μl RNase-Free Water,室温放置1分钟,12000rpm离心1分钟,收集RNA溶液,-70℃保存RNA,防止降解。
注意:
1)RNase-Free Wate体积不应小于30μl,体积过小影响回收率。
2)如果要提高RNA的产量,可用30-50μl新的RNase-Free Water重复步骤14。
3)如果要提高RNA浓度,可将得到的溶液重新加入到吸附柱中,重复步骤14。
储存条件:室温(15~30℃)。
北京现货2×Babuddy MasterMix(含染料)特价促销关键词:2×Babuddy MasterMix(With Dye),2×Babuddy MasterMix(含染料),WE0110
·TBST(pH8.0,10×)
编号:WE0310
规格:500ml
·口腔拭子基因组DNA提取试剂盒
编号:WE0179
英文名称:Swab Genomic DNA Extraction Kit
规格:50次|200次
本试剂盒提供一种简单快速分离纯化口腔拭子样本总DNA的方法。该试剂盒采用可特异性结合DNA的硅基质膜和独特的缓冲系统,高效专一吸附DNA,每个拭子可得到0.5-3.5μg基因组DNA,提取的DNA片段大、纯度高、质量稳定可靠。适用于酶切、PCR、文库构建、Southern杂交等实验。
试剂盒组成:
| 组份 | 50次 | 200次 |
| Buffer GR | 25ml | 120ml |
| Buffer GL | 25ml | 120ml |
| Buffer GW1(浓缩液) | 13ml | 52ml |
| Buffer GW2(浓缩液) | 15ml | 75ml |
| Buffer GE | 15ml | 60ml |
| 蛋白酶K | 25mg | 90mg |
| 蛋白酶K 储存液 | 1.25ml | 5ml |
| 吸附柱DS及收集管 | 50套 | 200套 |
| 离心管(1.5ml) | 50个 | 200个 |
产品特点:
1、采用硅基质膜原理,简单、快速从口腔拭子中提取基因组DNA。
2、提取的基因组DNA片段大、纯度高。
3、单个拭子样本得率达到0.5-3.5μg。
自备试剂:无水乙醇。
实验前准备及重要注意事项/strong>:
1、向蛋白酶K 中加入指定用量(1.25ml/5ml)的蛋白酶K 储存液使其溶解,-20℃保存。配制好的蛋白酶K 勿长时间室温放置,避免反复冻融,以免影响其活性。
2、第一次使用前应按照试剂瓶标签说明在Buffer GW1和Buffer GW2中加入无水乙醇。
3、使用前若发现Buffer GL有沉淀,请将Buffer GL于56℃水浴溶解。
4、全部离心步骤可在室温下进行。
5、取样:使用口腔拭子在口腔内壁擦拭6次,晾干2小时保存,为确保样本不被食物或饮料污染,取样前30分钟内请勿进食和饮水。
操作步骤:
1.将口腔拭子的棉签用剪刀从杆上剪下,置于2ml的离心管(自备)中,加入400μl Buffer GR。
注意:如需无RNA污染的基因组DNA,可加入4μl浓度为100 mg/ml 的RNase A溶液(货号:WE0225S),震荡混匀。
2.加入20μl 蛋白酶K 和 400μl Buffer GL,立即涡旋震荡15秒,充分混匀。
注意:加入Buffer GL后立即充分混匀;不可将蛋白酶K 直接加入Buffer GL中使用。
3.56℃放置10分钟,短暂离心,使管壁上的溶液收集到管底。
4.加入400μl无水乙醇,涡旋震荡充分混匀,短暂离心,使管壁上的溶液收集到管底。
注意:加入无水乙醇后可能会产生白色沉淀,不会影响后续实验。
5.将上步所得溶液和沉淀分两次加入到已装入收集管的吸附柱中,一次最多不超过700μl 。12000rpm(~~13400×g)离心1分钟,倒掉收集管中的废液,将吸附柱重新放回收集管中。
6.向吸附柱中加入500μl Buffer GW1(使用前检查是否已加入无水乙醇),12000rpm离心1分钟,倒掉收集管中的废液,将吸附柱重新放回收集管中。
7.向吸附柱中加入500μl Buffer GW2(使用前检查是否已加入无水乙醇),12000rpm离心3分钟,倒掉收集管中的废液,将吸附柱重新放回收集管中。
注意:如需进一步提高DNA纯度,可重复步骤7。
8.12000rpm离心1分钟,倒掉收集管中的废液。将吸附柱置于室温数分钟,以彻底晾干。
注意:这一步的目的是将吸附柱中残余的乙醇去除,乙醇的残留会影响后续的酶促反应(酶切、PCR等)。
9.将吸附柱置于一个新的1.5ml离心管中,向吸附柱的中间部位悬空加入50μl Buffer GE或灭菌水,室温放置2-5分钟,12000rpm离心1分钟,收集DNA溶液,-20℃保存。
注意:
1)如果下游实验对pH值或EDTA敏感,可以用灭菌水洗脱。洗脱液的pH值对洗脱效率有很大影响,若用水做洗脱液应保证其pH值在7.0-8.5(可以用NaOH将水的pH值调到此范围),pH值低于7.0时洗脱效率不高。
2)若需长期保存,推荐用Buffer GE洗脱并于-20℃保存。
储存条件:室温(15~30℃)。
北京现货2×Babuddy MasterMix(含染料)特价促销关键词:2×Babuddy MasterMix(With Dye),2×Babuddy MasterMix(含染料),WE0110
ARB13534 兔乙酰胆碱受体抗体(AChRAb)血清中含量检测 Rabbit acetylcholine receptor antibody,achrab ELISA KIT
DEPC-PBS溶液(活跃) 500ml
1,2-茚满二酮 Brilliant green 16214-27-0
ARB11954 大鼠Ⅱ型胶原(Col Ⅱ)酶免分析 Rat collagen type Ⅱ,col Ⅱ ELISA KIT
BTN120692 硫*(代"酸")庆大霉素溶液 Gentamycin Sulfate Solution
75621-03-3 CHAPS
D-正缬*酸 Chitodextrinase 2013-12-9
BTN131222 咪唑溶液 Imidozol Solution
BTN100826 穿刺培养基 Stab Medium
632-99-5 碱性品红 Magenta Red
Spinner盐溶液(含酚红) 1×|10× 500ml
PY01-043 铬酸* 500克
N-羟基琥珀酰亚胺 Lithium acetate dihydrate 6066-82-6
107-43-7 Betaine 甜菜碱
明胶水溶液(2%,无菌) 100ml
ARB10077 人CD4分子(CD4)elisa检测操作说明书 Human cluster of differentiation,cd4 ELISA KIT
ARB12945 小鼠血红素氧合酶2(HO-2)Elisa定量检测 Mouse heme oxygenase 2,ho-2 ELISA KIT
人血清白蛋白(组份五) NTA 70024-90-7
72-19-5 L-Threonine L-苏*酸
N-乙酰-L-谷*酰胺 Cytochalasin B 2490-97-3
5-硝基愈创木酚* N-Acetyl-L-Proline 67233-85-6
L-来苏糖 CHAPS 1949-78-6
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