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- 经科
- 中国
- JKG038
- 2025年12月18日
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上海经科化学科技有限公司
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/
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50次
PicaGreen（效果同PicoGreen）dsDNA 定量检测试剂盒 *2000次*10×100μL
PicaGreen（效果同PicoGreen）dsDNA 定量检测试剂盒 *2000次*1mL
OligoGreen（效果同OliGreen）ssDNA 定量检测试剂盒 *2000次*10×100μL
OligoGreen（效果同OliGreen）ssDNA 定量检测试剂盒 *2000次*1mL
ROX参比染料 [ ROX Reference Dye ]50μL
ROX参比染料 [ ROX Reference Dye ]200μL
ROX参比染料 [ ROX Reference Dye ]500μL
ROX参比染料 [ ROX Reference Dye ]1ml
SUPER Green I （效果同SYBR Green I）核酸染料（20× DMSO溶液）（PCR级）500μL
SUPER Green I （效果同SYBR Green I）核酸染料（20× DMSO溶液）（PCR级）1mL
荧光定量PCR试剂盒SYBR Green QPCR mix
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文献和实验几个复孔，选择重复性好的 CT 值参与计算。 （2）CT＜30，重复性较差。这种情况一般同操作有关。 解决办法：从以下几个方面进行问题的排查：①加样准确度；②移液器吸取液体的准确度；③定期校准 qPCR 仪。 ①加样准确度 避免小体积加样，减少加样误差。可以将引物、SYBR Green Mix、ddH2O 配置成混合体系，并且增加模板的稀释梯度，大体积加样。如：原液 cDNA 添加 1μl，可以更改为原液 cDNA 稀释 5 倍，添加 5μl，使用 ddH2O 补齐体系至 20μl 即可
SYBR Green Quantitative PCR Protocol
12μl of master mix for each well, plus some excess1 Rxn: 10μl SYBR Green Mix 52 Rxn: 520μl SYBR 0.4μl Forward Primer (10μM stock) 20.8μl F
PCR产物的荧光值就可以。参比染料的作用是标准化荧光定量反应中的非PCR震荡，校正加样误差或者是孔与孔之间的误差，提供一个稳定的基线。现在很多公司已经把ROXTM配制在MasterMix或者Premixture里。如果反应曲线良好或已经优化好反应体系，也可以不加ROXTM染料校正。通常来讲，real-time qPCR的反应程序不需要像常规的PCR那样，要变性、退火、延伸3步。由于其产物长度在80-150bp 之间，所以只需要变性和退火就可以了。SYBR@Green等染料法，最好在PCR扩增程序结束
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