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嵘崴达
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FastStart Universal SYBR Green Master (Rox)
- 规格:
10 x 5 mL
FastStart™ 通用SYBR® Green预混液(ROX)
FastStart Universal SYBR Green Master (Rox)
| packaging | pkg of 200 x 50 μL reactions (04913850001) |
| pkg of 2000 x 50 μL reactions (04913914001) |
Features and Benefits
• 改善PCR灵敏和特异性。
最大限度减低非特异性扩增产物的形成。
• 避免对qPCR结果的过度预计。
消除可增加量化的SYBR Green I结合量的非特异性扩增产物和引物二聚体。
• 对一系列的DNA或cDNA靶标进行扩增和检测。
扩增最长达500 bp的片段,包括高GC或高AT的。
• 在qPCR制备中节省时间和工作。
免去了降成分混合、优化MaCl2浓度或进行其他耗时优化优化步骤的需要。
• 防止来自残留污染的假阳性结果。
使用这种含有dUTP的预混液配合尿嘧啶-DNA糖基化酶对来自之前PCR反应的残留DNA污染进行清除。
Components
2x浓度的FastStart Universal SYBR Green Master (Rox)预混液含有FastStart Taq DNA聚合酶、反应缓冲液、核苷酸(dATP, dCTP, dGTP, dUTP)、SYBR Green I以及参考染料。
Quality
功能测试:每个批次都采用三种类型模板对在qPCR中的性能进行测试:高GC模板、高AT模板及长片段模板(约440 bp)。
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文献和实验SYBR Green Quantitative PCR Protocol
12μl of master mix for each well, plus some excess1 Rxn: 10μl SYBR Green Mix 52 Rxn: 520μl SYBR 0.4μl Forward Primer (10μM stock) 20.8μl F
%,避免引物内含有互补序列,3』端尽量不要出现含有连续三个以上的 G 或 C 的片段,真核基因设计引物时最好跨内含子哦。 选择合适 ROX 参照染料 各位同学在选购产品、做实验时,首先要弄清自己实验室的仪器对应哪种 ROX(High 还是 Low)!试剂买回来,样也加好了,最后发现不能用在自家仪器上,内心也一定是很崩溃。诺唯赞的染料法荧光定量专用预混液提供各种 ROX 供选择,如果不想这么麻烦,ChamQTM Universal SYBR® qPCR Master Mix (Q711)那是极好
the dye to use as the passive reference,也就是设置我们反应体系是否含有参比荧光。这里需要根据实际情况进行选择,不正确的定义参比荧光同样会导致最终结果的异常。例如图 7 中实验采用染料法进行相对定量分析,但是结果中的扩增曲线异常(图 7A),排查多组分图时发现 SYBR 在扩增循环过程中荧光信号变化正常,但是细致来看作为参比荧光的 ROX 信号却在整个反应过程中信号接近于零(图 7B)。我们知道扩增图谱纵坐标 ΔRn 的数值是报告基团荧光信号和参比荧光信号的比值
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