OligoGreen ssDNA 定量检测试剂盒

OligoGreen ssDNA Assay Kit（OligoGreen单链DNA定量试剂盒）是一种在分子生物学研究中广泛使用的超灵敏荧光检测试剂盒，专门用于精确定量溶液中的寡核苷酸和单链DNA（ssDNA）。

1. 作用原理与特性

荧光染料结合：该试剂盒的核心是一种超灵敏的绿色荧光核酸染料（OligoGreen/OliGreen）。当该染料与单链DNA或寡核苷酸结合后，其荧光信号会显著增强，且荧光强度与ssDNA的浓度在一定范围内呈正比1。

超高灵敏度：与传统的260 nm紫外吸光度法相比，OligoGreen法的灵敏度可高出约10,000倍，能够检测到低至 100 pg/mL 的微量ssDNA。

高特异性与抗干扰性：该染料对ssDNA具有高度亲和力，而对dsDNA、RNA、游离核苷酸及蛋白质等杂质的结合能力极低。此外，它不易受盐离子、尿素、乙醇、洗涤剂等常见污染物的干扰，非常适合复杂混合物中的核酸定量。

操作简便：无需繁琐的分离纯化步骤，只需将染料与样品混合，室温孵育数分钟即可进行荧光读取。

2. 荧光特性

激发/发射波长：最大激发波长（Ex）约为 480-500 nm，最大发射波长（Em）约为 520-525 nm。

适用仪器：兼容各种荧光分光光度计、荧光计（如Qubit）以及配备相应滤光片的荧光微孔板读数仪。

3. 试剂盒组成
试剂盒通常包含以下组分：

OligoGreen荧光染料：浓缩的荧光核酸染料（通常溶于DMSO）。

TE缓冲液（或稀释缓冲液）：用于稀释染料和样品的专用缓冲液（如10 mM Tris-HCl, 1 mM EDTA, pH 7.5）。

寡核苷酸/ssDNA标准品：用于绘制标准曲线的已知浓度DNA模板。

4. 溶解与配制

工作液配制：使用前需将浓缩的OligoGreen染料用TE缓冲液按比例稀释为工作液。

容器要求（关键）：配制和混合试剂时，必须使用塑料容器（如聚丙烯管）。严禁使用玻璃器皿，因为染料或核酸极易吸附在玻璃表面，导致荧光信号丢失和定量不准。

5. 储存条件

温度要求：试剂盒需在 -20℃ 条件下避光保存。

注意事项：OligoGreen染料对光敏感，操作全程需尽量避光。建议将染料按单次实验用量分装，避免反复冻融导致荧光淬灭7。若发现染料管壁或管盖有液体残留，使用前可短暂离心将其收集至管底。