矿物油

特别提示：包括矿物油在内，本公司的所有产品仅可用于科研实验，严禁用于临床医疗及其他非科研用途！

产品名称：矿物油
英文名称：Mineral oil
产品货号：SY0051
产品规格：100ml

Polymerase Chain Reaction (PCR)过程中常使用矿物油封液，以避免由无热盖PCR仪器或PCR管盖密封不严对扩增造成的影响，防止液体挥发。

除了矿物油,，我公司还供应以下相关产品：



名称：可逆型Taq DNA聚合酶抑制剂
货号：BTN60901
规格：0.3mL
Taq DNA聚合酶是进行PCR的zuì常用工具酶，但是由于它在常温下还是具有部分活性，所以经常会出现非特异的扩增产物，尤其是当PCR反应体系中有大量非特异DNA存在的时候。目前zuì常见的解决方法是使用抗Taq DNA聚合酶的抗体和使用经过化学修饰的热启动Taq DNA聚合酶(如AmpliTaq Gold)，但前者的缺点是加热后抗体会不可逆失活，后者的缺点是需要预热处理使酶激活。

产品特点：
1.可逆抑制Taq DNA聚合酶的活性，即常温抑制Taq酶活性，在45℃以上抑制功能丧失，当温度降低到45℃以下后，抑制活性又得以恢复。
2. 耐热，产品本身为非蛋白质试剂，远比Anti-Taq抗体稳定，便于保存和运输。
3. 使用简单，在加Taq酶前将本产品按PCR反应体积的1/10直接加入即可。
4.适用范围广，除Taq DNA聚合酶外，还可用于抑制其他DNA聚合酶的活性，如：Tth pol、Stoffel片段、Tfl pol、Tbr pol等。而一种酶的抗体一般对另一种酶的活性没有抑制作用。
5.与后续的RT-PCR兼容。

储存条件：低温运输，-20℃保存，有效期一年。

使用方法：
在加入Taq或Tth DNA聚合酶之前，按PCR反应终体积1/10的比例将本产品加入到反应体系中混匀，然后再加入DNA聚合酶，启动PCR反应。

名称：随机六聚体引物
货号：RFT106
规格：100μl
pd(N)6随机六聚体引物含有6个碱基的随机序列引物。5’末端带有磷酸基，3’末端为羟基末端。5’-P-d(NNNNNN)-3’ N = G, A, T or C。随机引物适用于长的或具有发夹结构的RNA。它的特异性较低，常用于获取5’末端序列或从带有二级结构区域的模板获取cDNA。为了能得到较长的cDNA，需要经过摸索确定样品中引物与RNA的比例。该产品是含有6个碱基的随机引物，已经配成20倍的即用型溶液，如20μl反应体系中使用1μl。本品浓度为0.2μg/μl(100μM)

适用范围：
1、第一链cDNA合成。
2、用随机引物与[α-32P]dCTP组合，可以代替切口平移法进行DNA的标记，准备成的探针可以直接应用于DNA杂交。

储存条件：-20℃，避免反复冻融。

名称：Pfu DNA聚合酶
货号：JN0016
规格：250U|250U×5
  本酶为Pyrococcus furiosus中分离的pfu DNA pol基因在大肠杆菌中进行表达后经多步纯化分离而得。Pfu DNA聚合酶具有3′→5′外 切酶(校正)活性，当聚合反应发生碱基错配时，聚合酶的校正活性可将错配的碱基切除。Pfu DNA聚合酶为使用范围zuì广的高保真DNA聚合酶，其错误率仅为1.3x10-6，推荐Pfu DNA聚合酶用于需高保真的PCR反应。

产品组成：

组份	JN0016-250U
Pfu DNA 聚合酶（5U/μl）	50μl
dNTP混合液(各10mM)	200μl
10×Pfu DNA Buffer with Mg2+	2ml

产品用途：用于要求保真度比较高的PCR反应，包括克隆PCR、DNA片段拼接、引入 突变、全基因合成，DNA片段的补平等（参见实验方案）。

使用建议：
Pfu DNA聚合酶产生的PCR产物为平滑末端，无3′端"A"突出，其PCR产 物的克隆有几种方案。
1、PCR前引物进行5′端加磷修饰或将PCR产物磷酸化处理后再直接克隆 于平滑末端的载体中（参见实验方案）。
2、将产物3′末端加A后再与T载体连接（参见实验方案）。
3、引物中引入15bp与载体同源序列，利用BalbRec PCR产物一步定向无缝克隆试剂盒（Cat# JN0001）直接连接到目的载体。
由于Pfu DNA聚合酶的校对活性可引起引物从3′端被部分降解。因此在设计引物时应适当增加引物的长度，理想的引物长度为20-30碱基。另外为了减少由3′→5′外切酶活性引起的引物降解，尽量在冰上配制反应体系，并zuì后加入Pfu酶。

应用实例：


图例一）50μl扩增体系中，以5ngλDNA为模板，对500bp～6.0kb片段的扩增结果。
泳道1：0.5kb；泳道2：1.0kb； 泳道3：2.0kb；泳道4：3.0kb； 泳道5：4.0kb；泳道6：6.0kb 泳道M：1kb DNA Marker；

图例二） 50μl扩增体系中，分别以50ng～0.05ng人基因组DNA为模板，可对特定基因片段（380bp）进行很好的扩增。
泳道1：50ng；泳道2：5ng；泳道3：0.5ng；泳道4：0.05ng；泳道M：DNA 2000 Ladder

常用反应体系（50μl）

10×Pfu Buffer	5μl
上游引物	0.2-1.0μM(终浓度)
下游引物	0.2-1.0μM(终浓度)
dNTP(各10mM)	1.0μl
模板	1-50ng（质粒）
	10ng-1μg(基因组)
Pfu	0.25μl（1.25U）
ddH2O	至50μl
*Mg2+终浓度为1.5mM

常用PCR循环：

当扩增片段<3K：

温度	时间	循环数
94℃	1分钟30秒
94℃	30秒	30次循环
57℃	30秒
72℃	根据产物长度调整，60秒/kb
72℃	5分钟
4℃	保温

当扩增片段≥3K（推荐引物长度≥30bp）：

温度	时间	循环数
94℃	20秒
94℃	5秒	30次循环
68℃	根据产物长度调整，60秒/kb
72℃	5分钟
4℃	保温

质量保证：经多次柱纯化，SDS-PAGE检测纯度大于95%；PCR 方法检测无大肠杆菌DNA残留，无核酸内、外切酶污染。

活性定义：在74℃条件下，30分钟内催化10nmol dNTP的掺入反应成为酸不溶性物质所需的酶量为一个单位。