可视化LAMP扩增试剂盒(防污染)北京现货

特别提示：包括可视化LAMP扩增试剂盒(防污染)在内，本公司的所有产品仅可用于科研实验，严禁用于临床医疗及其他非科研用途！

产品名称：可视化LAMP扩增试剂盒(防污染)
英文名称：Colorimetric LAMP Kit(anti-contamination)
产品货号：BTN180703
产品规格：50次

本试剂盒在2×LAMP MagicMix中整合了dUTP-UNG防污染系统，解决了LAMP扩增非常容易污染的这个棘手问题。同时整合了本公司的LAMP可见光染料(货号：BTN130833)，不需要任何仪器即可肉眼判断是否有扩增。

本试剂盒使用改良的Bst DNA聚合酶，使本产品既可用DNA为模板于LAMP扩增，也可用RNA模板进行RT-LAMP扩增。DNA聚合酶只有在40℃以上时扩增才启动，反应特异性更强。扩增效率更高，扩增效率可达到10⁹～10¹⁰，比PCR灵敏一个数量级，可检测到单拷贝的DNA分子。

试剂盒组成：

组分	规格
2×LAMP MagicMix	500μL
LAMP阳性对照模板-引物混合物	50μL
超纯水	1mL

保存条件：-20℃保存，有效期一年。

注意事项：
1．引物设计对成功扩增十分关键。除用于SNP分型外，尽量以保守区设计引物。
2．引物至少包括F3/B3和FIP/BIP，加入环状引物F loop/B loop可以使反应速度大大提高。
3．应优化引物序列、GC含量和尽量避免二级结构。
4．LAMP扩增具有特异性好、灵敏度高、时间快、不需要特殊仪器设备等优点。
5．要确证扩增的为目标基因，可以使用特定的限制性酶切和/或Southern杂交。

使用方法：

1．配制自备的5×LAMP引物混合液。
  先加超纯水（不要用TE）将各引物干粉稀释到母液浓度，然后在一新的离心管中按表中所列体积加入各种引物和超纯水，最后得到1mL的5×LAMP引物混合液。如果需要配制的5×LAMP引物混合液体积大于或小于1mL，则各成分的用量请按比例调整。此混合液可以在-20℃放置2年。

引物名称	母液浓度	加入量	在混合液中浓度
FIP引物	100μM	80μL	8μM
BIP引物	100μM	80μL	8μM
F3引物	100μM	10μL	1μM
B3引物	100μM	10μL	1μM
Loop F	100μM	20μL	2μM
Loop B	100μM	20μL	2μM
超纯水		780μL

2．在新的反应管中设置LAMP或RT-LAMP反应：

加入物	样品管	阳性对照	阴性对照
2×LAMP MagicMix	10μL	10μL	10μL
5×LAMP引物混合液(自备)	4μL	-	4μL
模板DNA或RNA(自备)	1-100ng	-	-
LAMP阳性对照模板-引物混合物	-	4μL	-
超纯水	补水至20μL

3．混匀，此时反应液呈现淡紫色。置于63℃保温60-120分钟（如果是在PCR仪中保温，必须加热盖。如果用金属浴保温，没有热盖，建议覆盖50μL石蜡油，否则保温期间反应体系的水分会蒸发，影响反应效率）。
  注意：如果不使用Loop引物，则最好保温2小时。
4．80℃10分钟灭活Bst DNA聚合酶。
5．如果有阳性扩增，则反应液将变成淡蓝色，如果没有阳性扩增，反应液将还是淡紫色。标准的反应结果如下图（左边6个为阳性，右边2个为阴性）：

6．如果需要电泳确认，则取扩增产物5μL直接在2%的琼脂糖凝胶电泳（不需要再加上样液），可见LAMP特征性电泳图谱。

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