高保真KOD试剂盒

特别提示：包括高保真KOD试剂盒在内，本公司的所有产品仅可用于科研实验，严禁用于临床医疗及其他非科研用途！

产品名称：高保真KOD试剂盒
产品货号：HQF07
产品规格：50U/200U/1000U

KOD DNA polymerase 是从克隆有α –型高保真DNA聚合酶的大肠杆菌中分离纯化所得，具有3`→5`核酸外切酶活性，保真性能比普通Taq聚合酶高80倍。具有较高的延伸速率，在推荐的条件下大于每分钟2kb，PCR产物为平端，可与直接接入本公司Blunt平端连接载体中。用于高保真、快速扩增目标DNA，环拉法引入点突变，补平DNA粘性末端等。
经酶切实验检测无外源核酸酶污染，PCR方法未检测到宿主DNA残留，能够有效扩增大肠杆菌基因组DNA。
酶活定义：
在推荐的缓冲反应体系中，以大马哈鱼精DNA为模板，68℃、30min内合成10nmol核酸所需要的酶量为一个活性单位。
保存条件：
储存溶液为：50mM Tris-HCl（pH7.6），50mM KCl，1mM DTT，0.1mM EDTA，50%(V/V) glycerol，－20℃存放一年，无明显活性丧失。冰袋运输 。

除了高保真KOD试剂盒,，我公司还供应以下相关产品：



名称：MTS细胞增殖与细胞毒性检测试剂盒
货号：BTN140634
规格：500次
MTS是一种新型甲臜化合物，和MTT同属四唑氮衍生物。MTS能被活细胞里的线粒体脱氢酶降解而产生棕黄色水溶性的甲臜，通过测定甲臜的光谱吸收，进而可以测定细胞的增殖情况。原理如下：


产品特点：
1．本试剂盒是单溶液式细胞增殖与细胞毒性检测试剂，主要成分包含MTS和一个电子耦合试剂，溶液的稳定性强，反应的灵敏度高。
2．操作简便、快捷。可直接加入到检测平板。在96-孔板中检测时，无需洗涤或收获细胞，免去溶解步骤。
3．无放射性。不需要配制液闪混合物，也不需要处理废弃物。
4．与MTT相比，使用更安全。不需要使用挥发性的有机溶剂来溶解甲臜产物。
5．操作灵活，与MTT不同，平板读数后可放回温箱继续孵育，使颜色进一步生成。

储存条件：低温运输，-20℃避光保存，有效期半年。

使用效果：
96孔板中加入细胞100μL/孔(约1×104)，37℃，5% CO2细胞培养箱培养24小时，加入适当浓度的受试化合物。培养箱中孵育适当时间，每孔中加入10μL的MTS细胞增殖及毒性检测溶液。37℃孵育1-4小时。490nm波长检测光密度。

备忘录：
1．细胞的存活率：将各测试孔的OD值减去本底OD值(完全培养基加MTS细胞增殖及毒性检测溶液，无细胞)或空白药物孔OD值(完全培养基加受试药物的不同稀释度加MTS细胞增殖及毒性检测溶液，无细胞)，各重复孔的OD值取均数±SD。细胞的存活率以T/C%表示，T为加药细胞的OD值，C为对照细胞的OD值。
细胞存活率% =(加药细胞OD/对照细胞OD)×100
2．求出T/C = 50%时的药物浓度(IC50)及T/C = 10%时的药物浓度(IC90)

名称：DNA ladder 2000
货号：SNM519
规格：60T

名称：线粒体提取试剂盒
货号：SNM527
规格：50T

名称：TUNEL检测阳性对照制备试剂盒(可配套TUNEL系列试剂盒使用)
货号：KFS196
规格：20T|200T
TUNEL 检测同时需要设阳性和阴性对照，以显示试验的客观性及准确性。可使用本试剂盒制备阳性片（使用客户自备样本），其后续步骤与待测样本同样进行。

名称：TUNEL细胞凋亡检测试剂盒(FITC标记POD法,通用)
货号：KFS197
规格：20T|50T|100T
TUNEL 细胞凋亡检测试剂盒（FITC 标记/POD 法）是用来检测细胞在凋亡过程中细胞核DNA 的断裂情况，其原理是生物素（biotin）标记的dUTP 在脱氧核糖核苷酸末端转移酶（TdT Enzyme）的作用下,可以连接到凋亡细胞中断裂DNA 的3’-OH 末端，再以streptavidin-FITC 与生物素结合，使结果可用荧光显微镜检测；荧光素亦可被偶联过氧化物酶Peroxidase（POD）的抗荧光素抗体(POD-conjugated Anti-FITC)标记,在POD 底物二氨基联*胺（DAB）的存在下，产生很强的颜色反应（呈棕色），特异准确地定位正在凋亡的细胞，因而在普通光学显微镜下即可观察和计数凋亡细胞。由于正常的或正在增殖的细胞几乎没有DNA 的断裂，因而没有3’-OH 形成，很少能够被标记或染色。

注意事项
1. 各个样本请用免疫组化笔做好标记，另外加2 张样本切片分别用于阳性片和阴性片制备并做好标记。
2. 在每步反应或浸洗的间隙时，配制下一步即用的工作液。
3. 反应液zuì好根椐计算好的样本数量集中配制，再分别滴加于各样本上，避免因每个样本单独配制而产生的试剂损耗，TdT 酶反应液如需短暂保存时，请置于冰上。
4. 配制好的DAB 工作液应为浅棕色，如颜色过深，请勿使用。
5. 操作请戴手套，防止试剂沾染皮肤，如有沾染请立即用大量清水冲洗。

名称：DCFH-DA活性氧ROS荧光探针
货号：QN1289
规格：25mg|100mg
别名：二氯二氢荧光素-乙酰乙酸酯
CAS号：4091-99-0

名称：Caspase 9活性检测试剂盒
货号：HR0433
规格：20T/50T/100T
Caspase 9活性检测试剂盒(Caspase 9 Activity Assay Kit)是采用分光光度法检测细胞或组织裂解液中Caspase 9酶活性或纯化的Caspase 9酶活性的试剂盒。
Caspase(Cysteine-requiring Aspartate Protease)是一个在细胞凋亡过程中起重要作用的蛋白酶家族。线粒体释放细胞色素c以后，caspase 9可以和细胞色素c以及Apaf1形成复合物，同时被激活。激活的caspase 9可以激活细胞凋亡的zuì关键酶caspase 3，从而促进后续的细胞凋亡信号。Caspase 9的激活可以通过磷酸化进行调控。
本Caspase 9活性检测试剂盒是基于casepase 8可以催化底物Ac-LEHD-pNA产生黄色的pNA，pNA在405nm 附近有强吸收，从而可以通过测定吸光度来检测caspase 3的活性。
本试剂盒用酶标仪检测或容量不超过100μl的分光光度检测杯检测，可用于培养细胞或新鲜组织样本的caspase-9检测。

储存条件：裂解缓冲液和检测液室温保存；其他-20℃避光保存。
有效期：一年。

注意事项：
● 须自备可以测定 A405或A400的酶标仪或容量不超过100μl的分光光度检测杯及相应分光光度计。优先考虑测定A405。
● 37℃下反应如果颜色变化不明显，可以适当延长反应时间。
● 适合采用 Bradford 法进行蛋白浓度测定。
● 如果样品中蛋白含量低，裂解样品时需设法使样品中的蛋白浓度接近 1-3mg/ml。
● 如果样品中激活的caspase 水平很低，适当调节诱导细胞凋亡的时间，找一个caspase 激活比较强的时间点进行检测。
● Ac-LEHD-pNA 避光保存，使用过程中尽量避光。
● Ac-LEHD-pNA溶液冻存后可能产生沉淀，使用前请混匀。

使用方法：
一、裂解缓冲液和检测缓冲液配制
根据待测样品数准备裂解缓冲液和检测缓冲液，每1ml缓冲液中加入10μl DTT。
二、样品处理
A、细胞样品
1．收集2-5×106个细胞，在4℃，500×g条件下离心2-3分钟，小心吸取培养基，尽可能吸干，收集细胞。
2．用冷PBS 洗涤细胞两次，每次洗涤后尽可能吸干上清。
3.在细胞中加入100μl冷的裂解缓冲液，高速涡旋振荡15秒。
4．置冰上15分钟，每隔5分钟高速涡旋振荡15秒。
5.在4℃，500×g条件下离心5分钟。
6．快速将上清吸入另一预冷的干净离心管，置于冰上或-80℃冰箱保存备用。
B、组织样品
1．取适量组织样本剪碎，按照50mg/100μl冷的裂解缓冲液，用组织匀浆器匀浆至无明显肉眼可见固体(或用液氮研磨)，冰上静置15分钟，小心将上清吸入另一预冷的干净离心管。
2.在4℃，500×g条件下离心5分钟。
3．快速将上清吸入另一预冷的干净离心管，置于冰上或-80℃冰箱保存备用。
三、对上述处理过的上清用Bradford 法进行蛋白定量。
四、Caspase 9活性检测
1．取10μl大约含20-50μg蛋白的裂解上清，加入90μl检测缓冲液。
2．再加入10μl Ac-LEHD-pNA(使用前请混匀)，在37℃下避光反应1-2小时，有黄色颜色产生即可进行检测，如果颜色变化不明显，时间可以延长，甚至孵育
过夜。部分样品中激活的caspase-9 水平较低，颜色变化不明显，直接上机检测，与对照组样品产品变化即可。
3．测定A405nm或A400nm。
4．根据凋亡诱导的细胞的吸光值与空白对照细胞的吸光值的比值计算相对的Caspase 9活性程度。