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- JC9313
- 2025年07月11日
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- 详细信息
- 文献和实验
- 技术资料
- 保存条件：
4℃
- 库存：
大量
- 供应商：
上海机纯实业有限公司
- 规格：
100T
操作步骤(仅供参考)：
接种一个单菌落于50ml LB培养基中，37℃中速(200～250r/min)摇床过夜。按1:100的比例将过夜培养的菌液加入到新鲜的LB培养基，继续培养至OD600为0.3～0.4。
加入等体积的预冷的一步法感受态细菌制备液中，冰上温和的混匀。
菌液分成小份，迅速冻存，于-70℃长期保存。进行转化时，冻存菌液应缓慢融化。
迅速融化冻存菌，将100μl感受态细菌和1～5μl DNA(0.1～100ng)加入到预冷的EP管中，4℃放置10～60min。
加入1ml Lea感受态培养液，37℃温和振荡培养30～60min。
凃板于LB平板上，培养，挑取单克隆，鉴定并保存。
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文献和实验相关专题 DNA连接与转化 大肠杆菌的基因工程 SS方法制备感受态细菌 (又称一步法) 一、 准备工作 1、 缓冲液1×TSS的配制： 事先配制1M的氯化镁——20.3g氯化镁(6分子 水结晶)/定容于100ml去离子水 后封装，不用灭菌。 取干净的100ml 量筒和100ml 烧杯，用量筒量取100ml去离子水，加入至烧杯中，取 1 g 蛋白胨，0.5g 酵母抽提物，0.5g 氯
为6.5，混匀后用0.22um 滤器过滤除菌。储存在4度，保质期约6个月。 2、已划平板（或者用枪头沾取并稀释后涂布）并在培养箱中过夜培养的菌种——Dh5α，用于接种并振荡培养。.两个锥形瓶，分别装有30 ml和50mlLB，灭菌后置于4℃冰箱备用。 3、 若干已灭菌的 琼脂 平板，一个未加 抗生素 ，用于第二步的接种。其余做转化用。 二、 感受态制备程序： 1、 前一天晚上调单菌落至30 mlLB中过夜
碧云天生产的超级感受态细菌制备试剂盒(Supercompetent Cell Preparation Kit)是一种用于快速制备高转化效率大肠杆菌 感受态细菌的试剂盒。超级感受态细菌制备试剂盒是在传统超级感受态细菌制备方法的基础上进行适当改良而成，操作便捷，转化效率高。使用本试剂盒可以使感受态效率达到108-109 cfu/μg质粒。对于小的质粒效率略高，而对于大的质粒则效率略低一些。用本试 剂盒制备的超级感受态细菌不仅可以转化质粒，而且非常适合于转化普通的连接产物，特别适合于转化平端
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