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99
- 细胞类型:
科研
- 物种来源:
鼠/人/其它
- 细胞形态:
上皮样/成纤维样/其它
- 运输方式:
常温运输/干冰运输
- 生长状态:
贴壁/悬浮
细胞常规说明:
培养条件:89%基础培养基+10%FBS+1%双抗
冻存液成分:10%DMSO+40%FBS+50%基础培养液
细胞质检情况:不含细菌、真菌、支原体等微生物污染
传代建议:1:2~1:3传代,2~3天换液1次
特别提醒:签收细胞后,如细胞状态不佳,或培养中遇到问题,烦请当天尽快联系,以便处理。当天及时反馈细胞情况和细胞照片是售后跟踪处理重要的参考依据,请务必重视。
悬浮细胞接收后的操作流程与注意事项
1.如签收时出现培养瓶壁破裂,漏液等情况请及时做好照片记录并联系实验室
2.拧松瓶盖,细胞瓶竖立培养8h(或过夜)
3.待细胞沉底后吸除上层液体(含碎片残渣,请小心操作),然后吸取沉底的细胞层(2ML左右转移到新的培养瓶,加入新鲜的完全培养基(如细胞状态较差可将血清浓度调高到15%)继续培养
悬浮细胞常规培养传代流程(请严格遵照无菌操作)
1.将培养瓶/皿中的细胞重悬混匀
2.吸取2/3或者一半混匀后的细胞悬液到新的培养瓶/皿
3.分别在原瓶/皿和新分瓶的培养瓶/皿加入等量或者2倍的新鲜培养基,使细胞密度保持在5 X10(5) /ml左右
4.注意培养基PH值变化情况和细胞密度,定期半量换液(每周2-3次),待细胞密度大于2 X 10(6) /ml以后重复1项操作或者冻存
贴壁细胞接收后的操作流程与注意事项
1.收到细胞当天尽快更换新鲜完全培养基,第二天再进行消化处理
2.如果细胞收到时呈悬浮或者部分悬浮的状态,请将悬浮的细胞即时离心,加15%血清的完全培养基到新的培养皿/瓶继续培养观察。同时原培养瓶中剩下的贴壁细胞更换为15%血清的完全培养基,培养观察
3.若出现生长不均:贴壁细胞若出现分布不均,成岛状生长,可将细胞进行消化,重悬打散细胞,加入新鲜培养基进行培养
贴壁细胞常规培养传代流程(请严格遵照无菌操作)
1.吸出原培养瓶中的培养基,PBS缓冲液润洗细胞两次,加适量0.25%胰酶进行消化细胞(注意把握消化时间)
2.镜下观察消化情况,在细胞边缘缩小,贴壁松动时(不建议消化到细胞漂浮)去掉胰酶,加6~8ml 完全培养基,轻轻吹打细胞层,尽量把细胞层吹落,吹散
3.取部分细胞悬液转移到新的培养皿/瓶中,添加适当的完全培养基,把细胞悬液打匀,于培养箱中培养
4.注意培养基PH值变化情况,定期换液(每周2-3次),待细胞密度达到80%以后重复1项作或者冻存
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等人 [20] 于近期首先发现转录因子 Tcf-4 和 β-catenin 共同上调 c-Myc 基因调控因子 enhance E 的表达,然而 luciferase reporter 实验结果仅能证明 β-catenin 和转录因子 Tcf-4与enhance E 的相关性,无法提供证据表明这两种细胞因子如何作用于 enhance E 基因上。因此,他们采用了 ChIP 技术,证明前列腺癌 LnCAP 细胞中是 Tcf-4 而不是 β-catenin 直接结合到 enhance E 基因上,这就表明
miR-370的高表达通过下调转录因子FOXO1的表达诱导前列腺癌细胞增殖
,它作为一种肿瘤抑制因子与各种关键的细胞功能有关,包括细胞生长、细胞的分化、细胞凋亡以及血管生成。所以,令人迷惑的是FOXO蛋白为何在肿瘤细胞中低表达。microRNA是一种非编码的含有20~22个核苷酸的单链RNA,它可以使靶基因的转录受到抑制,沉默或降解靶基因,对调控基因的表达起到极大的作用。最近的研究发现,在5种前列腺癌细胞系中miR-370比正常的前列腺上皮细胞显著高表达。miR-370的异常表达诱导前列腺癌细胞DU145和LNCaP的增殖,并促进细胞的非依赖型锚定增长和细胞克隆的形成;相反抑制细胞
外泌体(Exosomes)是一种细胞分泌到胞外的囊泡,其大小为 30-150 nm,呈茶托状结构,内部含有核酸(DNA 和 RNA)、蛋白质、脂质等多种分子。外泌体参与细胞间的沟通,可以将其装载的分子传递给不同细胞,改变受体细胞内部一些分子的含量,从而影响受体细胞的状态和功能。 图一 图片来自于丁香园 随着我们对外泌体深入的了解,外泌体在液体活检中的诊断价值逐渐显现。谈到液体活检,我们最先想到的是循环肿瘤细胞(CTC)和循环肿瘤 DNA(ctDNA),而外泌体作为一种新的液体活检方式,正在
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