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动物组织/细胞基因组DNA提取试剂盒

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  • ￥450
  • WKSUBIO
  • WJS002-50
  • China
  • 2025年12月29日
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    • 英文名：

      FlaPure Animal Tissue/Cell /Blood DNA Extraction Kit

    • 保质期：

      1年

    • 供应商：

      瓦兰生物

    • 保存条件：

      常温

    • 规格：

      50T

    FlaPure Animal Tissue/Cell /Blood DNA Extraction Kit
    高效动物组织/细胞/血液基因组 DNA 提取试剂盒
    一.  产品简介
    本试剂盒可从≤25 mg 新鲜或冷冻的动物组织（比如鼠尾、鼠趾、肝脏等）、血液、细胞中快速提取基因组 DNA。 试剂盒采用优化的缓冲体系，使裂解液中的DNA高效特异地结合到硅基质吸附柱上。提取过程无需使用苯酚或氯仿等有毒溶剂，得到的 DNA 浓度和纯度高，可直接用于酶切、PCR、文库构建  Southern Blot、分子标记等下游实验。
    二.  产品组成
    产品细节图片1
    三.  产品特点
    DNA质量高：提取的DNA浓度和纯度较高，适用于对浓度、纯度和完整性要求较高的下游实验；
    安全低毒：无需酚、氯仿等有毒试剂。
    四.  使用方法
    1. 样本处理
    1) 血液及细胞样本：
    a. 哺乳动物抗凝血液（无核红细胞）：直接向 50~200 μL 新鲜或冷冻的抗凝血液样品中加入 BufferGA1 补足至 200 μL；
    b. 禽类，鸟类，两栖类或更低级生物的抗凝血液：其红细胞为有核细胞，取 5~20 μL 新鲜或冷冻的抗凝血液样品，加入 Buffer GA1 补足至 200 μL；
    c. 贴壁培养的细胞：应先处理为细胞悬液（最大提取量为 5×10 6个细胞），10,000 rpm（~11,200×
    g）离心 1 min，弃尽上清，加 200 μL Buffer GA1，振荡至样品彻底悬浮；
     
    注意：如需去除 RNA，可在上述步骤完成后，加入 4 μL 浓度为 100 mg/mL 的 RNase A 溶液，涡旋 15 s，室温放置 5 min。
    2. 加入 20 μL Proteinase K 溶液，混匀后加入 200 μL Buffer GA2，涡旋振荡充分混匀，70˚C 水浴 10 min；
    3. 短暂离心以去除管盖内壁的水珠。加入 200 μL 无水乙醇，涡旋振荡充分混匀，短暂离心，进入步骤 4 过柱纯化；
    2）动物组织样本：
    1. 样本处理：正确的组织取样量是获得理想产量和纯度的关键。初次使用时，推荐动物组织量为10~15 mg， 根据实验过程及结果再调整用量。样品可用液氮研磨，或机械/玻璃匀浆器等工具进行匀浆。
    a. 针对普通动物组织、内脏组织等易于研磨的样本：
       液氮研磨：将研磨后的样品置于 1.5 mL 离心管中，加入 200 μL Buffer GA1；
       匀浆器匀浆：匀浆前向样本中加入≤80 μL Buffer GA1 进行匀浆，匀浆后再加入120 μL Buffer GA1；
    b. 针对鼠尾等含较硬组织的样本（过夜消化 6~8 h）：将组织样品直接置于 1.5 mL 离心管中，加入200 μL Buffer GA1；
    注意：确保各组织的量不超出推荐范围。样品量过多可能导致裂解不充分，导致裂解液粘稠堵塞吸附柱，可能造成提取失败或得率低。
    2. 加入 20 μL Proteinase K (20 mg/mL)，涡旋振荡彻底混匀。普通动物组织 56˚C 水浴充分裂解1~3 h（鼠尾等较硬样本需过夜消化 6~8 h），期间可数次颠倒或振荡使样品分散。如需去除 RNA，可在此步骤完成后，加 入 4 μL 浓度为 100 mg/mL 的 RNase A 溶液（目录号：GP708），涡旋振荡 15 s，室温放置 5~10 min；
    注意：若涡旋振荡或孵育后仍有胶状物，可再次加入 20 μL Proteinase K 后孵育或延长孵育时间。
    3. 加入 200 μL Buffer GA2，涡旋振荡充分混匀，70˚C 水浴 10 min。短暂离心后加入 200 μL 无水乙醇， 立即涡旋振荡充分混匀（此步骤可能会产生白色沉淀，不影响后续实验，某些组织如脾、肺，可能形成溶胶状产物，此时推荐进行剧烈振荡或涡旋处理），进入步骤 4 过柱纯化；过柱纯化：
    4. 短暂离心，将步骤 3 所得溶液和絮状沉淀全部加入吸附柱中（吸附柱放入收集管中），12,000rpm（~13,400 ×g）离心 30 s，倒掉收集管中废液，将吸附柱重新放回收集管中，若一次不能加完溶液，可分多次转入；
    5. 向吸附柱中加入500 μL Buffer GW1（使用前检查是否已加入无水乙醇），12,000 rpm（~13,400×g）离心 30 s，倒掉收集管中废液，将吸附柱重新放回收集管中；
    6. 向吸附柱中加入600 μL Buffer GW2（使用前检查是否已加入无水乙醇），12,000 rpm（~13,400×g）离心 30 s，倒掉收集管中废液，将吸附柱重新放回收集管中；
    7. 重复步骤 6 ；
    8. 12,000 rpm（~13,400×g）离心 2 min，开盖室温晾干数分钟；
    注意：此步为去除残余漂洗液，不可省略。
    9. 将吸附柱置于新的离心管（自备）中， 向吸附膜中间部位悬空滴加 50~200 μL Buffer TE 或ddH2O，室温放置 2~5 min，12,000 rpm（~13,400 ×g）离心 2 min，收集 DNA 溶液，-20℃保存 DNA。
    注意：
    1) 若需增加产量，可将得到的溶液重新加入到吸附柱中，室温放置 2~5 min，12,000 rpm（~13,400×g）离心 2 min；
    2) 如果下游实验对 pH 值或 EDTA 敏感，可以用灭菌水洗脱。洗脱液的 pH 值对洗脱效率有较大影响，若用水作洗脱液应保证其 pH 值在 7.0~8.5（可以用 NaOH 将水的 pH 值调到此范围），如需长期保存，推荐用 Buffer TE 洗脱并于 -20°C 保存。

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