高保真平末端pfu DNA聚合酶

特别提示：包括高保真平末端pfu DNA聚合酶在内，本公司的所有产品仅可用于科研实验，严禁用于临床医疗及其他非科研用途！

产品名称：高保真平末端pfu DNA聚合酶
英文名称：pfu DNA Polymerase
产品货号：RFT101
产品规格：100U(40μl)|5×100U(5×40μl)

本品是嗜热古细菌来源的DNA聚合酶，该酶除具有5’-3’DNA聚合酶活性外，还具有很强的3’-5’外切酶活性，增强了PCR扩增的保真度。与Taq酶相比，pfu聚合酶热稳定性更好，更能忍耐较高的变性温度。Pfu的保真性是Taq DNA聚合酶的10-15倍。延伸速度为0.5kb/分钟。PCR产物3’端不带碱基A，为平滑末端，要通过平滑末端克隆法进行克隆。适用于高保真的DNA片段的扩增、DNA片段的平滑化。

试剂盒组成：
pfu DNA Polymerase(2.5U/μl)-————————40μl
10×pfu PCR buffer(含Mg2＋)—————————1ml

活性定义：1单位(U) pfu DNA Polymerase活力定义为在74℃、30分钟内，以活性化的大马哈鱼精子DNA作为模板/引物，将10 nmol脱氧核苷酸掺入到酸不溶物质所需的酶量。

贮存液：50 mM Tris-HCl (pH 8.0); 0.1 mM EDTA; 1 mM DTT; 50 mM KCl ; Stabilizers; 50% glycerol

使用方法：
1、按照下表在0.2ml PCR管中制备反应体系：

成分	20μl反应体系	50μl反应体系	终浓度
Template	0.04-0.2 μg	0.1-0.5 μg	as you wish
Primer 1(10μM)	0.4μl	1μl	0.2μM
Primer 2(10μM)	0.4μl	1μl	0.2μM
10×pfu PCR buffer(含Mg2+)	2μl	5μl	1×
dNTP Mixture(10 mM)	0.4μl	1μl	200μM each
pfu (2.5 U/μl)	0.4μl	1μl	0.05U/μl
ddH2O	up to 20μl	up to 50μl	-

注1：如果需要改变Mg2+浓度，根据下表调节

PCR反应体系中Mg2+终浓度	2 mM	2.5 mM	3 mM	4 mM
20μl反应体系中25 mM MgSO4加入量	0μl	0.4μl	0.8μl	1.6μl
50μl反应体系中25 mM MgSO4加入量	0μl	1μl	2μl	4μl

注2：配制反应液时，请最后加入pfu，因为本酶有很强的3’-5’外切酶活性，有可能降解引物。
2、混匀后，离心快甩将反应液收集到管底。
3、PCR仪如果没有热盖加热的话，补加25μl矿物油。
4、PCR仪上执行以下程序：

步骤	温度	时间	循环数
初始变性	94℃	3-5 min	1
变性	94℃	30 sec	25-40*
退火	50-60℃*	30 sec
延伸	72℃	0.5kb/min*
最后延伸	72℃	5 min	1

注：PCR 反应条件视模板、引物等的结构条件不同而各异。在实际操作中需根据模板、目的片段的大小、碱基序列和引物的长短等具体情况，设定最佳的反应条件(温度、时间等)。

注意事项：
1、pfu 酶具有 3’-5’的外切酶活性，所以 pfu 酶扩增时延伸速度远比 Taq 酶低，应根据扩增产物的长度设置相应的延伸时间，一般情况下 pfu 酶的延伸速度为每分钟 0.5kb；同时 pfu 酶的 3’-5’的外切酶活性可能降解引物，所以应最后把pfu 酶到反应体系中，并立即进行 PCR 反应。
2、pfu 酶的热稳定性比 Taq 酶好，对于 GC 含量很高的模板，变性温度可以提高到98℃，对 pfu 酶的活性无影响。

储存条件：-20℃，有效期一年。

除了高保真平末端pfu DNA聚合酶,，我公司还供应以下相关产品：



名称：2%明胶溶液(PCR级)
货号：BTN70905
规格：1.5mL
大量实验显示一定比例的明胶能够促进PCR反应。本产品为2%的明胶溶液，按1/5到1/20(具体取决于PCR反应体系)的比例加入到PCR反应体系中，可以提高PCR的效率。

储存条件：低温运输、-20℃保存，有效期一年。

名称：5M甜菜碱溶液，PCR级
货号：BTN70902
规格：1.5mL
本产品为浓度为5M的甜菜碱的水溶液，可以直接加入到PCR反应或测序反应中提高扩增或测序的效率，其详细的用途包括：
1. 降低富含GC的模板形成二级结构的可能,有助于富含GC的模板的PCR扩增和测序。
2. 降低变性温度对碱基的依赖性。
3. 提高LA-PCR的扩增效率。
4. 提高Taq DNA聚合酶的稳定性。

储存条件：低温运输，4℃保存，有效期一年。

使用方法：将本产品加入PCR反应体系中，使其终浓度在1.0-1.7M之间即可。其他按常规操作进行即可。


名称：BaldStar Taq DNA Polymerase
货号：WE0111
规格：500U|2500U
  BaldStar Taq DNA Polymerase是一种经化学修饰的、全新高效的Taq DNA Polymerase，在常温下酶的活性被完全封闭，使得该酶在低温或常温下没有活性，从而有效避免在常温条件下由引物和模板非特异性结合或引物二聚体而产生的非特异性扩增，酶的激活须在95℃下孵育10分钟。独特的缓冲体系使酶的应用更为广泛，使GC含量高、二级结构复杂以及低拷贝的模板，均能高效扩增。用本品进行PCR扩增，PCR产物3"末端含有A，可直接用于T/A 克隆。本产品特异性强，PCR扩增后无需胶回收去除杂带，可直接用于下游克隆或芯片杂交等实验。主要应用于常规的PCR、RT-PCR、Real-time PCR、多重PCR、基因芯片分析和SNP检测，特别适用于对特异性要求较高的PCR反应。

产品组成：

组份	500 U	2500U
BaldStar DNA Polymerase，5 U/μl	100μl	5×100μl
5×BaldStar PCR Buffer	1.9ml	5×1.9ml

注意：本产品的5×BaldStar Taq PCR Buffer中含有8.5mM镁离子。

活性定义：
用活性化的大马哈鱼精子DNA作为模板/引物，在74℃，30分钟内，将10 nmol脱氧核苷酸掺入到酸性不溶物质所需的酶量定义为1个活性单位(U)。

质量控制：
1、SDS-PAGE检测纯度大于99%；
2、经检测无外源核酸酶活性；
3、PCR方法检测无宿主残留DNA；
4、能有效扩增人基因组中的单拷贝基因；
5、室温存放一个月，无明显活性改变。

使用方法：
以下举例为以人基因组DNA为模板，扩增1 kb的片段的PCR反应体系和反应条件，实际操作中应根据模板、引物结构和目的片段大小不同进行相应的改进和优化。

1、PCR反应体系

试剂	50μl反应体系	终浓度
5×BaldStar PCR Buffer	10μl	1×
dNTP Mix，10 mM each	1μl	200μM each
Forward Primer，10μM	2μl	0.4μM
Reverse Primer，10μM	2μl	0.4μM
Template DNA	<0.5μg	<0.5μg/50μl
BaldStar DNA Polymerase，5 U/μl	0.5μl	2.5 U/50μl
ddH2O	up to 50μl

注意：引物浓度，请以终浓度0.1-1.0μM作为设定范围的参考。扩增效率不高的情况下，可提高引物的浓度；发生非特异性反应时，可降低引物浓度，由此优化反应体系。

2、PCR反应条件

步骤	温度	时间	循环数
预变性	95℃	10 min
变性	95℃	30 s	30-40个循环
退火	55-65℃	30 s
延伸	72℃	60 s
终延伸	72℃	5 min

注意：
1)一般实验中退火温度比扩增引物的熔解温度Tm低5℃，退火时间一般为30-60 s，无法得到理想的扩增效率时，适当降低退火温度；发生非特异性反应时，提高退火温度，由此优化反应条件。
2)延伸时间应根据所扩增片段大小设定，本产品中所包含的BaldStar Taq DNA Polymerase的扩增效率为1-2 kb/min。
3)可根据扩增产物的下游应用设定循环数。如果循环次数太少，扩增量不足；如果循环次数太多，错配机率会增加，非特异性背景严重。所以在保证产物得率的前提下应尽量减少循环次数。
4)本产品须在预变性95℃，10 min条件下实现酶的活化。

储存条件：-20℃，避免反复冻融。