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6个月
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江西江蓝纯生物试剂有限公司
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产品简介:
外源基因导入真核细胞的方法有很多种,如磷酸钙转染法、DEAE-葡聚糖转染法、脂质体法、电穿孔法、显微注射法等。Leagene Lipofect脂质体转染试剂(Lipofect Transfection Reagent)是一种新型的阳离子脂质体转染试剂,适用于把质粒、siRNA或其它形式的核酸包括DNA、RNA、寡核苷酸以及核酸蛋白复合物或带负电荷的蛋白转染到真核细胞中。
Lipofect脂质体转染试剂该转染试剂对于常见的哺乳动物细胞具有较高的转染效率,较的重复性,且操作简以及单细胞毒性较小,可用于贴壁细胞和悬浮细胞。Lipofect脂质体转染试剂使用方法与Lipofectamine® 2000 Reagent极为相似。该转染试剂转染细胞时, 基本不受细胞培养液中的血清和抗生素的影响,即可以在血清和抗生素存在的情况下进行细胞转染。但为了取得佳的转染效果,推荐转染时使用不含抗生素的含血清的细胞培养液。
Lipofect脂质体转染试剂
注意事项:
注意无菌操作,尽量避免污染,
使用高纯度DNA或RNA有助于获得较高的转染效率,同时DNA不应含有蛋白和酚。
影响转染效率的因素有很多,如细胞类型、细胞状态及密度、DNA/siRNA转染量、转染试剂与 DNA/siRNA比例等,应该在具体实践中优化来确定佳转染条件。
为了取得较高的转染效率,推荐使用在50代以内的细胞进行转染,转染前细胞必须处于良的生长状态。
为了取得较高的转染效率,推荐使用高纯度的质粒,OD260/OD280≥1.8。
Lipofect脂质体转染试剂不应Vortex或离心,宜缓慢晃动混匀。
为了您的安全和健康,请穿实验服并戴一次性手套操作。
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文献和实验转染的定义是“将具生物功能的核酸转移或运送到细胞内并使核酸在细胞内维持其生物功能”。其中,核酸包括DNA (质粒和线性双链DNA ),反义寡核苷酸及RNAi(RNA interference)。基因转染技术已广泛应用于基因组功能研究(基因表达调控,基因功能,信号转导和药物筛选研究)和基因治疗研究。基因转染需要一定的转染试剂将带有目的基因的载体运送到细胞内。早期的磷酸钙转染法转染效率很低,且对很多细胞株无效,因此不能满足很多科研工作的需要。目前,最常用的转染试剂是阳离子脂质体和阳离子聚合
本次实验采用的脂质体是promega公司的TransFast脂质体试剂,它是一种阳离子脂质体和中性脂质体的混合物,是对于本次实验中采用的293T细胞优化的转染试剂。 三、实验材料与器材 1、材料 293T细胞 MyoD表达质粒和EGFP表达质粒 DMEM培养基 链霉素/青霉素(双抗) FCS(小牛血清) PBS(磷酸盐缓冲溶液) 胰酶/EDTA消化液 转染试剂(TransFast2、器材 20ul/200ul/1ml微量移液器和Tip头 酒精
了。 最后就是平时可能会忽略的转染试剂本身的脱靶效应 off-target effect,转染试剂本身对基因表达水平(高表达或低表达)的影响,有时候可能会造成假阳性的结果。 一般的细胞,用脂质体 2000 和 fugeneHD 转染效率相差不大,虽然有文献说脂质体 2000 脱靶效应很高,但国内在乎的人貌似不多;但是干细胞,原代细胞和肿瘤细胞等一些比较难转的细胞系,Fugene HD 比较温和,细胞毒性很低,转染效率明显要好;悬浮细胞,各有千秋,要是都不行,就电转。
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