Lipofect5000 质粒转染试剂

 Lipofect5000是在研究了国外同类产品性能的基础上开发的一款通用型核酸转染试剂，适用于将质粒DNA转染入哺乳动物细胞。Lipofect5000具有非常优异的转染性能，可转染绝大多数贴壁细胞和部分悬浮细胞。在贴壁培养的Hela细胞中，Lipofect5000质粒DNA（EGFP质粒）的转染阳性率可高达70%以上。特别地，对于血管内皮细胞，Lipofect5000具有更加优异的转染性能，转染阳性率可高达85%以上。Lipofect5000具有特别显著的性价比优势，在拥有较高转染阳性率的同时，价格也非常优惠，特别适合于一般的质粒转染实验。对质粒转染要求较高的研究者，建议选用abs60255  质粒DNA转染试剂等。
 

产品特点：

1、可高效转染多种贴壁细胞和部分悬浮细胞等，在贴壁细胞中的转染阳性率可高达70%以上。

2、 特别适合于血管内皮细胞的质粒转染，转染阳性率可高达85%以上；

3、 显著的性价比优势，转染性能显著优于PEI，是目前价格较低的脂质体类质粒转染试剂。

贴壁细胞转染方法步骤（以24孔板转染质粒DNA为例）:

A、细胞接种：

1、 转染前一天将细胞铺板（使用不含抗生素的完全培养基），每孔2.0×105个细胞左右，使转染时细胞密度为90%；

2、最好在转染开始之前更换新鲜的含血清培养基，以防转染后孵育阶段细胞密度太大、营养不足导致细胞死亡。
 

B、Lipofect5000/DNA复合物包装（该步完成后应立即进行转染）：

1、使用前混匀转染试剂，在1.5 ml无菌离心管A中加入50µl无血清

培养基，并添加适量的转染试剂（参见附表）。用移液器轻轻混匀后在室温静置5-10分钟。

2、在1.5ml无菌离心管B中加入50µl无血清培养基，并添加适量的DNA，用移液器轻轻混匀后在室温静置5~10分钟。

3、将DNA-培养基混合物滴加至Lipofect5000-培养基混合物中，用移液器轻轻混匀后在室温静置15~20分钟后，立即转染。

注意：离心管最好使用聚丙烯离心管。
 

C、转染：

1、将步骤B制备的复合物滴加至细胞培养孔中。轻轻晃动培养板以使复合物均匀分布。

2、转染4小时后，向培养孔中加入适量的溶液A，轻轻晃动培养板，使溶液A与培养基混匀，具体见下表。

3、 培养24小时后即可观察，但最佳观察时间为36-48小时。如果需要，细胞培养6~24小时后可以更换新鲜完全培养基，但不是必须。

4、 收获细胞，进行后续实验。对于稳定转染，在转染24~48小时后，用选择培养基传代培养。

-20°C 保存，有效期一年，使用前请轻轻混匀。