一步法荧光定量RT-PCR试剂盒

特别提示：包括一步法荧光定量RT-PCR试剂盒在内，本公司的所有产品仅可用于科研实验，严禁用于临床医疗及其他非科研用途！

产品名称：一步法荧光定量RT-PCR试剂盒
英文名称：One Step qRT-PCR Kit
产品货号：ALH195
产品规格：50μl×50次|50μl×100次

本试剂盒是采用SYBR Green I 嵌合荧光法进行Real Time PCR 的专用试剂，用本制品进行Real Time qRT-PCR 可在同一反应管内连续进行。反应过程中无需打开管盖添加试剂并可对扩增产物进行实时检测，避免了污染的同时提高了检测灵敏度和实验效率。非常适合于微量RNA 尤其是微量RNA病毒的检测。本试剂盒包括最适合Real Time PCR的突变改造M-MuLV H Minus逆转录酶、热启动HotMaster Taq DNA聚合酶和RNasin抑制剂mix、同时包含适用于逆转录和PCR扩增的优化独特反应体系。本酶M-MuLV(RNase Hˉ)的RNase H活性缺失，与M-MuLV 相比，具有更强的延伸能力和稳定性。同时该酶提高了耐热性，可以在42-50℃反转录，提高了复杂二级结构，GC含量丰富模板反转录效率。而采用优质热启动酶HotMaster Taq DNA Polymerase可以最大限度的减少PCR扩增全程中的非特异性扩增产物产生，大大提高了荧光定量PCR反应的精确性。本制品可以在宽广的定量区域内得到良好的标准曲线，对靶基因进行准确定量检测，重复性好，可信度高。

试剂盒组份(50次)：
2 XqRT-PCR Mix (含Sybr Green I)-——————1.25ml
OneStep Enzyme Mix—————————————100μl
RNase free H2O———————————————1.5ml

适用范围：适用于高拷贝、低拷贝基因检测；部分高GC含量或具有复杂二级结构的RNA模板。

注意事项：
1. 当同时需要进行数次Real Time One Step qRT-PCR反应时，应先配制各种试剂的混合液（Master Mix，其中包括RNase-free ddH2O、Buffer、各种酶等），然后再分装到每个反应管中。这样可使所取的试剂体积更准确，减少试剂损失，避免重复分取同一试剂。同时也可以减少实验操作或实验样品之间产生的误差。
2. 使用Enzyme Mix时，分取之前要小心地瞬间离心收集到反应管底部；由于酶保存液中含有高浓度的甘油，粘度高，分取时应慢慢吸取。
3. 2×qRT-PCR Mix内含Sybr Green I，保存或配制One Step qRT-PCR反应液时应避免强光照射。
4. 为保证反应成功建议使用高质量的RNA模板。
5. 不同的片段，所需最佳RNA模板用量不同，过多的RNA会抑制反应，建议根据反应调整模板用量。
6. 只能使用特异性引物，不能使用Oligo(dT) 和Random Primer 进行反应。

储存条件：-20℃，有效期12个月。

本制品别名：一步法qRT-PCR试剂盒|一步法RT-qPCR试剂盒

除了一步法荧光定量RT-PCR试剂盒,一步法qRT-PCR试剂盒|一步法RT-qPCR试剂盒，我公司还供应以下相关产品：



名称：即用型荧光定量RT-PCR试剂盒
货号：BTN101219
规格：50次
本产品是基于荧光染料检测的即用型双酶一管式RT-PCR试剂盒，可以对靶片段进行实时定量RT-PCR分析(quantitative RT-PCR、qRT-PCR)。产品含有经过优化的缓冲液组分、MMLV-Taq DNA聚合酶混合物、dNTPs、MgCl2及新型荧光染料DNAgreen等所有一管式实时定量RT-PCR所需要的成分，用户只需加入RNA模板和引物即可进行实时定量RT-PCR反应，具有广泛的用途。

产品特点：
1.一管式完成qRT-PCR反应，避免样品交叉污染，尤其适合临床应用。
2. 即开即用，用户不需要单独准备qRT-PCR所需的各种试剂。
3. 主要成分只有两个(RT-PCR buffer和MMLV-Taq Mix)，将加样步骤减少到最低，极大降低了加样误差，增加了可重复性。
4. 使用范围广，适用于从病毒RNA到人RNA的各种RNA模板。
5.高灵敏度，每个RT-PCR体系最低可以检测200拷贝的RNA分子，可扩增的模版RNA的最长达2000nt。

试剂盒组成：

成分	规格
双酶一管式qRT-PCR Buffer，2×	750μl
MMLV-Taq Mix	100μl
RNase-free水	1ml
说明书	1份

储存条件：低温运输，-20℃保存，保存期限为一年。

使用方法：
1.在一干净的无RNase的PCR管中，先加入下列成分(下面只列出样品管的设置情况，用户可自己根据需要设置阳性和阴性对照)：

成分	样品
自备RNA模板(分下面三种情况)	见下
总RNA	100-500ng
或poly(A)mRNA	10-500ng
或体外转录得到的专一RNA	0.01pg-500ng
RNA特异性引物一(自备)	终浓度300nM(注1)
RNA特异性引物二(自备)	终浓度300nM
RNase-free水	补到10μL
双酶一管式qRT-PCR Buffer(2×)	15μl
自备ROX(某些荧光PCR机型需要)	3μL(注2)
MMLV-Taq Mix	2μl

 注1：通常初次使用本试剂时，可用引物浓度300nM进行实验，根据实验结果具体情况，在200～800nM范围内调整引物浓度。引物、待检样品的具体加量用户可以根据实际情况调整，同时增减RNase-free水用量，保证总反应体积不变即可。
 注2：如果使用ABI公司的7500，7700和7900三种型号的荧光PCR仪器，则需用自备的ROX进行Ct值校正。对ABI 7700和7900，ROX的最佳浓度为1×(即在每30μl反应体系中加3μl 10×ROX)。对ABI 7500，ROX的最佳浓度为0.05-0.1×(每30μL反应体系加0.3μL 10×ROX；也可将10×ROX稀释到1×，然后每个反应体系加入3μL 1×ROX)。ROX会在溶解曲线中产生噪音，因此，如果出现了杂峰，将软件中“Passive Reference Dye”中的“ROX”选项取消打勾，然后重新分析数据。对于iCycler IQ，MJ Opticon，MJ Chromo4，MX3000，MX4000，RotorGene3000，RotorGene 6000和LightCycler 480等型号的荧光PCR仪器，ROX不是必须的，但加入的话也不会影响整个PCR分析。
2. 轻柔混合均匀后放入PCR仪中进行荧光定量RT-PCR。
3. 设定RT-PCR反应条件时，一般将RT的条件设定成42℃ 30分钟，后接94℃变性5分钟，然后进入PCR循环(PCR参数将根据自备引物的Tm值和PCR产物长度由用户自行决定注)、最后72℃ 5分钟。并在退火或延长步骤中记录荧光信号。本产品中所含的荧光染料在没结合DNA时，最大吸收光谱在471nm，结合DNA时的最大吸收光谱在500nm，最大发射光谱在530nm。