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文献和实验TOPO克隆提供高效的一步法克隆策略，可以定向克隆平端PCR产物到入门载体。平端PCR产物定向克隆的效率>90%，从而简化了筛选。同时不再需要连接酶、PCR后续步骤或者限制性内切酶。目前有两种定向TOPO克隆载体。pENTR/D-TOPO 和pENTR/SD/ D-TOPO（表2和图3）有以下特点： 位于PCR产物插入位点两侧的attL重组位点可以与Gateway目的载体进行有效重组 通用M13位点便于测序 基于pUC的ori位点提供高产量质粒 大肠杆菌中卡那霉素（kanamycin
1. 假设下列是小鼠基因组DNA的一个片段，其中含有开放阅读框（ORF）吗？若有请标出起始和终止密码子位置。一般来说，该ORF是基因 编码序列的可能性大吗？ tctcaagaagatgtcgattccattctccaaccatcttagactcttcatgaggaaaaagaggaaaacaagttgaggacacggttttacctccaggac 2. 你设计了一对PCR引物，其中上游引物为22个碱基。公司代为合成后提供的产品是总量为2 OD的冻干物。请回答如何用TE缓冲
）猴病毒40（SV40） 猴病毒40（SV40）的基因组常用来作为克隆载体，把外源DNA转入哺乳类细胞。猴病毒40是球形动物病毒，直径40nm，呈20面体，有一个共价闭环的双链DNA基因组，全长5244bp。它在猴肾中增殖。被SV40感染的细胞都会出现SV40的T抗原。早已证明完整的小鼠染色体β珠蛋白基因（包括所有的间插顺序和两侧顺序）整合在SV40中后，在被感染的猴肾细胞中都能正确地转录和翻译。表明猴肾细胞的拼接系统能有效地处理小鼠β珠蛋白的初级转录本。 可是，SV40作为克隆载体有其局限
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