单线态氧检测试剂盒-022

特别提示：包括单线态氧检测试剂盒-022在内，本公司的所有产品仅可用于科研实验，严禁用于临床医疗及其他非科研用途！

产品名称：单线态氧检测试剂盒-022
产品货号：HR8787
产品规格：100T/200T

活性氧(Reactive oxygen species,ROS) 包括过氧化氢(H2O2，Hydrogen peroxide)、羟基自由基(•OH，Hydroxyl radical)、单线态氧(1O2，Singlet oxygen)、一*化氮(NO，Nitric oxide)、超氧阴离子(•O2-，Superoxide anion)、过氧化自由基(ROO• ，Peroxyl radical)、过氧羟自由基(HOO• ，hydroperoxyl)及其下游产物过氧化物过氧亚硝基阴离子(ONOO-，Peroxynitrite anion)、ClO-和羟化物等，参与细胞生长增殖、发育分化、衰老和凋亡以及许多生理和病理过程。活性氧(reactive oxygen species,ROS)的产生主要是氧化磷酸化的结果，在呼吸链中，在某些位点会有“泄露”的电子直接和氧气或和其他电子受体反应，在酶或非酶作用下引发一系列反应生成不同种类的活性氧：“泄露”的电子最初和氧气反应生成超氧阴离子自由基(O2·-)。超氧阴离子遇水生成H2O2，同时过氧化氢也可由氧气在单胺氧化酶(monoamine oxidase,MAO)的作用下生成，生成的过氧化氢在髓过氧化物酶(myeloperoxidase,MPO)的催化下与Cl-反应可生成ClO-，在铁或铜离子的催化下发生Fenton反应生成OH·，超氧阴离子遇氮氧化物反应生成ONOO-。这些生成的高氧化活性的物质统称为活性氧。
单线态氧检测试剂盒是利用单线态氧特异性荧光探针单线态氧探针O22检测单线态氧的试剂盒。单线态氧探针O22是合成的苯蒽类荧光探针，可以自由穿过细胞膜，进入细胞内后，与细胞内单线态氧反应，被氧化生成绿色荧光物质，绿色荧光强度与细胞内单线态氧水平成正比，检测绿色荧光就可以知道细胞内单线态氧的变化情况。
在激发波长488 nm，发射波长526 nm附近，使用荧光显微镜、激光共聚焦显微镜、荧光分光光度计、荧光酶标仪、流式细胞仪等检测绿色荧光，从而测定细胞内单线态氧水平。
我公司可以提供O21细胞膜不透性的单线态氧荧光探针，其不能穿过细胞膜，需要借助破膜剂进入细胞后与细胞内的单线态氧反应。O21可以用于液体的单线态氧检测(相关产品：HR8788)。

储存条件：-20℃保存。
【注】：
● O22 探针在2-8℃时是固体状态，从冰箱取出后恢复至室温或37℃短时间水浴，变成液体状态后离心至管底部再开盖。
有效期：一年。

※ ※ ※ 使用前请仔细阅读产品说明书 ※ ※ ※
使用限制：本试剂盒仅供科学研究使用，不可用于诊断或治疗。
产品更新：我公司会更新或升级产品，以优化和增强其使用性能，产品说明书会进行相应的版本更新。使用产品时，请参照随产品附带的说明书，不要参照网上下载的说明书，可能是不同的版本。需要最新电子版说明书时可以在收到产品后发邮件索取。
使用安全：使用时需要合适的实验室外套，一次性手套。避免皮肤或粘膜与试剂接触。如果试剂不小心接触皮肤或眼睛，应立即用水冲洗。

注意事项：
● 螺旋盖微量试剂管装的试剂在开盖前请短暂离心，将盖和管内壁上的液体离心至管底，避免开盖时试剂损失。
● 禁止与其他品牌的试剂混用，否则会影响使用效果。
● 样品或试剂被细菌或真菌污染或试剂交叉污染可能会导致错误的结果。
● 最好使用一次性吸头、管、瓶或玻璃器皿，可重复使用的玻璃器皿必须在使用前清洗并彻底清除残留清洁剂。
● 实验后完成后所有样品及接触过的器皿应按照规定程序处理。

产品特点：
● 使用方便：可用激光共聚焦显微镜直接观察、荧光分光光度计、荧光酶标仪或流式细胞仪检测；
● 背景低，灵敏度高；
●线性范围宽，使用方便。
试剂盒以外自备仪器和试剂耗材：
仪器：
● 激光共聚焦显微镜或荧光分光光度计或酶标仪或流式细胞仪，激发波长500 ± 10 nm，发射波长530 ± 10 nm,或者按照FITC荧光检测条件检测。
● 离心机 ● 移液器 ● 冰箱 ● 冰盒
试剂：
● PBS缓冲液(pH7.4，实验室常用的10mM磷酸缓冲盐溶液)
●或者HBSS(With：Calcium Magnesium Glucose； Without：Phenol Red。)
耗材：
● 离心管 ● 吸头

使用方法：

使用注意事项：
● 螺旋盖微量试剂管装的试剂在开盖前请短暂离心，将盖内壁上的液体收集至管底，避免开盖时液体洒落。
●荧光探针标记后，一定要洗净残余的未进入细胞内的探针，否则会导致背景较高。
● 探针标记完毕并洗净残余探针后，可以进行激发波长的扫描和发射波长的扫描，以确认探针的标记情况是否正常。
● 尽量缩短探针标记后到测定所用的时间，以减少各种可能的误差。
● 单线态氧O22在光照和空气中易被氧化，注意避光密封保存。
● O22染色工作液必须现配现用，并且在当天用完。
● O22对湿度非常敏感，若是O22溶液每次取完需要量后，必须紧紧密封盖子。建议根据单次用量，分装密封保存。不可使用含水的吸头。
●对不同的细胞和组织，应选择合适的孵育时间和浓度，以观察单线态氧的变化，很多细胞内的单线态氧绝对水平较低，需要根据实际情况适当延长孵育时间。
● 单线态氧O22探针可以根据需要的用量分装后冻存，避免反复冻融。
● 单线态氧O22不可以一次性全部稀释后长期保存不用，稀释后稳定性变差，有效期缩短。
单线态氧探针O22配制：
根据样本数量计算需要的用量，用探针稀释液5倍稀释单线态氧O22探针后充分混匀，避光保存备用。稀释后的单线态氧O22荧光探针最好在一个月内用完，尽量避免反复冻融。
【注】：
● 可以不用试剂盒的稀释液，直接用HBSS或不含血清的培养基稀释。
单线态氧O22探针标记：
1．单线态氧O22溶液可在新鲜无血清培养基、HBSS缓冲盐溶液或组织灌流液中稀释到所需浓度，终浓度按试剂盒的母液的100-200倍稀释，以此染色液更换细胞培养液或灌流液；也可直接向无血清细胞孵育液体或灌流液中加入单线态氧O22探针溶液至所需浓度。
2．依据细胞单线态氧含量的不同，单线态氧O22探针终浓度可选择在100-200倍稀释的范围，孵育时间可选择1-4小时，在37℃或室温进行避光孵育。
3．孵育结束后，用PBS等新鲜溶液清洗细胞或组织。漂洗时间要短。
荧光显微镜观察：
1．对贴壁生长细胞或活组织，可直接在荧光显微镜下观察；对悬浮生长细胞，取25-50μl细胞悬液滴到一张显微载玻片上，再盖上一张盖玻片。
2．荧光显微镜下观察。
流式细胞仪分析：
1．对贴壁生长细胞，用胰酶消化制备成单细胞悬液；对悬浮生长细胞，直接收集细胞。用0.5～1ml冰冷PBS重悬细胞(5～10万)。
2．采用488nm波长激发，测定待测细胞平均荧光强度。使用488nm激发波长，525nm发射波长，实时或逐时间点检测刺激前后荧光的强弱。探针O22的荧光光谱和FITC非常相似，可以用FITC的参数设置检测探针O22产物。

除了单线态氧检测试剂盒-022,，我公司还供应以下相关产品：
 

货号	名称	规格
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SK258-1	丙*酸羧化酶(PC)测试盒(微量法)	100管/96样
GL1843	活化凝血时间(ACT)检测试剂盒(凝固法)	50T
GL1851	优球蛋白溶解时间(ELT)检测试剂盒(加钙法)	50T
GL1897	植物总糖和还原糖检测试剂盒(硝基水杨酸法)	50T|100T
GL2032	抗酒石酸酸性磷酸酶(TRAP)检测试剂盒(PNP微板法)	120T
GL3149	吲哚乙酸氧化酶检测试剂盒(IAA比色法)	50T