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北京百奥莱博科技有限公司
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文献和实验引入染色体检测领域以来,FISH技术在临床诊断及科研工作中得到广泛运用,并显示出比传统技术的显著优势性。1986年.Dilla等首次用荧光素直接标记DNA探针检测人特异性染色体。接着Pinkel等利用生物素标记DNA探针,建立了间接荧光原位杂交技术,这一技术放大了杂交信号。提高了FISH的敏感性。此后,地高辛和二硝基苯酚等标记物以及各种不同颜色荧光素在FISH技术中被广泛利用,不断完善了该技术的信号检测系统。PCR技术与FISH的巧妙结合,不仅提高了制备探针的能力,也提高了该方法的敏感性,可用
标记原位杂交探针的标记物有20多种,可分为放射性标记物(放射性核素)和非放射性标记物两大类。 1.放射性标记物 原位杂交技术最初建立时就是以放射性核素作为标记物。目前,放射性核素仍用于探针的标记。常用的放射性核素有32 P、3 H、35 S等。用放射性核素标记探针有以下优点:放射性核素标记的核苷酸易掺入DNA和RNA分子中;标记反应的情况可通过特殊的仪器(闪烁计数器)进行监测;用放射性核素标记的探针进行的原位杂交反应,可用敏感性高的放射自显影技术检测。但放射性核素存在辐射危害
网络 第三节 DNA及寡核苷酸探针在原位杂交组织化学中的应用 一、DNA探针的应用 虽然一般认为DNA探针敏感度不如cRNA探针,但在病毒的检测等领域中DNA探针仍得到广泛的应用。 在原位杂交细胞化学的操作步骤方面与cRNA探针基本相同,所不同的是:(1)杂交时需先在高温80~95℃短时处理,使DNA探针及细胞内靶DNA变性,解离成单
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