pBalbAvi质粒

特别提示：包括pBalbAvi质粒在内，本公司的所有产品仅可用于科研实验，严禁用于临床医疗及其他非科研用途！

产品名称：pBalbAvi质粒
产品货号：JN0110
产品规格：20次(1μg)

  pBalbAvi-C专为目标蛋白C端融合Avi Tag设计，是预先用Nde I线性化的载体，可配合BalbRec PCR产物一步无缝克隆试剂盒（CatNo.JN0001）使用，用于在大肠杆菌中快速高效表达和蛋白质Biotin标记。
  为保证标记效率，请选择高表达biotin化酶的宿主菌BalbBiotin BL21（CatNo.PJN0020），也可以用其他兼容的宿主菌表达并纯化完成后用百奥莱博Biotinylation Kit（CatNo.PJN0020）进行体外Biotin标记。
  目的基因扩增按常规方法设计引物后，在5′端引物前添加以下序列：GAA GGA GAT ATA CAT； 3′端引物前添加：GAT GTC GTT CAG GCC。注意：5′端引物从第一个氨基酸开始（ATG）, 3′端引物不要包含终止密码子。

产品组成：

组份	规格
pBalbAvi-C	1ug
BalbRec 重组酶	20μl
10×BalbRec 重组缓冲液	50μl
Control Insert（50 ng/μl）	10μl
附赠
2×pfu MasterMix (快速上样型)	1ml
2×Fast Taq MasterMix(快速上样型)	1ml
DNA Ladder 2000 Plus	100μl

质量控制：pBalbAvi-C 线性化载体经过严格的自连测试以及连接效率测试。

除了pBalbAvi质粒,，我公司还供应以下相关产品：



名称：DNA去磷酸化试剂盒
货号：BTN130828
规格：20次
分子克隆时，载体的自连极大降低了连接效率，而对载体DNA 两个5′端的-PO4基团进行去磷酸化处理可以抑制自连反应。此外在进行DNA或RNA5′端标记前，也需要将其本来的-PO4基团去除再加上标记基团。本公司开发的DNA去磷酸化产品就是针对这一目的而开发。

产品特点：
1.基于细菌碱性磷酸酶，反应在较高温度进行，效率更高。
2. 把DNA和RNA 5′端的-PO4基团变成-OH基团，丧失连接能力。
3. 模板可以是单链，也可以是双链，既可以是DNA，也可以是RNA。
4.处理后的核酸纯化后可以直接用于连接反应和标记反应。
5. 本产品足够20次去磷酸化实验。

试剂盒组成

成分	规格
10×去磷酸缓冲液	100μl
细菌碱性磷酸酶(0.5U/μL)	50μl
超纯水	1ml
说明书	1份

储存条件：低温运输，-20℃保存，有效期为6个月。

使用方法：
注意：dNTP和ATP 也是碱性磷酸酶的底物，所以如果核酸溶液中有dNTP和ATP，一定要先将其去除。否则它们会耗掉大量的碱性磷酸酶，降低DNA 去磷酸化效率。

1、在微量离心管中配制下列反应液(50μL)：

成分	用量
DNA片段	不超过10pmol
10×去磷酸缓冲液	5μl
细菌碱性磷酸酶	2.5μl
超纯水到	50μl

2、65℃反应30分钟。如果是RNA样品，建议在37℃反应30分钟。
3、酚氯*抽提去除酶活性，乙醇沉淀DNA 待用(见附)。

附：酚/氯*抽提DNA、乙醇沉淀浓缩DNA(本试剂盒不提供相关试剂，需要从本公司另购相关试剂，下列操作仅供参考)：
1、在50μl DNA溶液中加入50μl超纯水增加体积，以免纯化过程中DNA 丢失。如果有必须，可以加入和4μL 核酸助沉剂提高回收效率。
2、加入100μL 酚/氯*/异戊*25：24：1 混合液震荡半分钟混匀，室温12000g离心3分钟，转移上清到新离心管中。
3、重复上步操作一次。
4、加0.1倍体积(即10μL)的3 M 乙酸钠溶液(pH5.2)。
5、再加入2.5倍体积(即250μL)的无水乙醇。
6、混匀后12000g 4℃离心10分钟，小心弃上清。
7、加入1mL 70%乙醇，短暂离心3分钟后小心弃上清。
8、短暂离心5秒，吸弃残留液体(约30-50μL)。
9、室温放置2分钟干燥后加入适量的超纯水溶解DNA，立即使用或放-20℃长期保存。