T7 RNA 聚合酶

特别提示：包括T7 RNA 聚合酶在内，本公司的所有产品仅可用于科研实验，严禁用于临床医疗及其他非科研用途！

产品名称：T7 RNA 聚合酶
产品货号：SV1341
产品规格：25KU|5KU

特性:
制备放射标记的 RNA 探针
合成用于体外翻译的 RNA
合成用于结构、加工和催化性能研究的 RNA
合成 RNA 反义链，调控基因表达
概述:
T3、T7 和 SP6 RNA 聚合酶分别对 T3、T7 和 SP6 噬菌体启动子具有高度的特异性。已开发出多种载体，可将目的基因序列克隆到 T7 和 SP6 启动子下游的多克隆位点中，以克隆的 DNA 为模板体外合成相应的 RNA。用 T7 和 SP6 RNA 聚合酶合成的 RNA 具有 mRNA 的生物特性，可进行准确剪切。实验证实，将克隆的 DNA 序列反向而产生的 RNA 反义链能特异性地阻断体内 mRNA 的翻译。由于 RNA/DNA 杂交体比 RNA/RNA 和 DNA/DNA 杂交体更稳定，因此核酸杂交反应中的检测信号会更强。
来源:
SP6 RNA 聚合酶来自重组 E. coli 菌株，该菌株携带克隆于 Salmonella typhimurium LT2Z 的 SP6 RNA 聚合酶基因。T7 RNA 聚合酶来自重组 E.coli BL21 菌株，该菌株携带可表达 T7 基因 I 的 pAR1219 载体。T3 RNA 聚合酶来自重组 E.coli 菌株，该菌株携带可表达 T3 基因载体。
反应条件:
1X RNAPol 反应缓冲液
[40 mM Tris-HCl (pH 7.9)，6 mM MgCl2，2 mM 亚精胺，10 mM DTT］。反应时需加入各 0.5 mM 的 ATP、UTP、GTP、CTP（不随酶提供）和带有启动子的模板 DNA，分别在 37℃（T3 RNA 聚合酶和 T7 RNA 聚合酶）或 40℃（SP6 RNA 聚合酶）温育。
质保声明:
无 RNA 聚合酶、DNase 和 RNase 污染。
单位定义:
1 单位指在 37℃（T3 RNA 聚合酶）（T7 RNA 聚合酶）或 40℃ 条件下（SP6 RNA 聚合酶），1 小时内将 1 nmol 的 ATP 掺入酸不溶物所需要的酶量。
浓度:
T3 RNA 聚合酶:50,000 units/ml；T7 RNA 聚合酶:50,000 units/ml；SP6 RNA 聚合酶:20,000 units/ml。

除了T7 RNA 聚合酶,，我公司还供应以下相关产品：



名称：Tth DNA聚合酶
货号：BTN90501
规格：250U
本酶来源于嗜热菌Thermus thermophilus HB8。在有Mg2+等二价阳离子存在的情况下，具有DNA多聚酶活性。它与Taq酶一样被广泛用于PCR反应，但耐热性比Taq酶高，因此对高GC含量模板的PCR 也有较好的效果。本酶基本上没有3′→5′外切酶活性及5′→3′外切酶活性，所以也可用于双脱氧法测序。另外，本酶具有RTase活性，在Mn2+存在的情况下，RTase活性会得到强化。利用该特性，可以用来在同一管中进行逆转录反应和PCR反应，即一步法RT PCR。(但是，在Mn2+存在时，RT-PCR的准确性不高)此外，本酶与Taq DNA多聚酶一样，PCR产物可通过T载体进行TA克隆。

产品特点：
1．RT-PCR反应的特异性增加：在较高的温度下进行逆转录，增加了引物杂交和延伸的特异性。
2．二级结构减少：在较高的温度下进行逆转录，减少了由于RNA二级结构引起的问题。

产品组成：

成分	规格
Tth DNA聚合酶(5U/μL)	50μl
10×Tth Buffer	1ml
说明书	1份

储存条件：低温运输，-20℃保存，有效期一年。

使用方法：
以λDNA为模板，以10×Tth Buffer(+MgCl2)作为缓冲液进行体积为50μL的PCR扩增反应为例

1．按下列组份配制PCR反应液。

成分	终浓度	用量
Tth DNA聚合酶(5U/μL)	1.25U	0.25μl
10×Tth Buffer(+MgCl2)	1×	5μl
dNTP Mixture(各2.5mM)	各0.2mM	4μl
模板DNA	50pg～1μg	详见下表
引物1(10μM)	0.1～1μM	最多到1μL
引物2(10μM)	0.1～1μM	最多到1μL
灭菌蒸馏水		加到50μL

推荐50μL PCR反应体系中模板DNA推荐使用量：

哺乳动物基因组DNA	0.5～1μg
酵母基因组DNA	5～500ng
细菌基因组DNA	0.5～50ng
质粒DNA	5～500pg
PCR回收片段	1～100pg

2．PCR反应条件
以λDNA为模板，扩增1kbp的DNA片段的PCR反应条件如下：

注：PCR反应条件视模板、引物等的结构条件不同而各异。在实际操作中需根据模板、目的片段的大小、碱基序列和引物的长短等具体情况，设定最佳的反应条件(温度、时间等)。

注意事项：
1．循环测序：该酶为耐热性酶，可通过与PCR 同样的温度条件进行测序反应。由于其高温稳定性好，对于复杂高级结构的模板效果较好。
2．引物：用于耐热性酶测序的引物需比用于非耐酶测序的引物设定更长的时间。采用较短的引物时，可能会出现不能获得条带变淡的情况。