PCNA细胞增殖检测试剂盒(ICF/FACS法)

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产品名称：PCNA细胞增殖检测试剂盒(ICF/FACS法)
英文名称：PCNA cell proliferation Detection Kit
产品货号：KFS335
产品规格：20T

PCNA 细胞增殖检测试剂盒（细胞免疫荧光法/流式细胞仪检测），PCNA是细胞DNA 多聚酶的“δ”辅助蛋白，是真核细胞DNA 合成时所必需的一种酸性核蛋白。PCNA 在细胞核内合成，并储存在核内，细胞处于静止状态时，其含量很低，当细胞进入增殖周期中，其表达明显增加，故PCNA 的表达高低可反映细胞增殖的活跃程度。

操作方法
1. 在zuì适的环境下培养细胞。
2. 除去培养液，用PBS 洗一次。
3. 胰蛋白酶处理和收集细胞，离心，（注意1）保证每管细胞数在106 个。
4. 用0.3 ml PBS 轻轻的重悬细胞, 然后慢慢加入0.7 ml 预冷的100%乙醇。用1 ml 玻璃移液管小心的混匀。在4°C 至少1h。（注意2）
5. 沉淀细胞，完全吸去上清。
6. 用150 μl PBS/1 % BSA 洗细胞2 次。
7. 用100μl 抗体孵育液（0.5% Tween-20/1%BSA/PBS）重悬细胞，加入1ul PCNA 抗体(1μg/106 cells)，室温孵育1 小时。
8. 离心收集细胞，用150μl1% BSA-PBS 洗2 次。
9. 离心收集细胞，用50μl 抗体孵育液重悬，加1μl (1.5μg/106 cells) 羊抗鼠IgG-FITC，室温孵育30 分钟。离心收集细胞，150μl PBS/ 1 % BSA 洗2 次。
10. 用含有终浓度为10 μg/ml RNase A 和20μg/ml PI 的0.5 ml PBS（pH7.4）重悬细胞。
11. 避光使细胞在室温下孵育20min 后，离心收集细胞，150μl PBS/ 1 % BSA 洗2 次后，转移至流式检测管中重悬。
12. FACS 检测或者储存于4℃。

注意事项
1.所有的沉淀细胞步骤为2,000 rpm, 5 min。
2.可渗透化处理细胞后细胞浓度大约为106 ，样品可以4°C 储存于乙醇中到2 个星期。
3.流式细胞检测时需要设立对照试验：
只用PI 染细胞
只用羊抗小鼠IgG-FITC 染细胞
未染色的细胞组

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