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- 详细信息
- 文献和实验
- 技术资料
- 库存:
277
- 保质期:
长期
- 供应商:
北京百奥莱博科技有限公司
- 保存条件:
室温
- 规格:
500ml
特别提示:包括乙醇-乙酸固定液(3:1)在内,本公司的所有产品仅可用于科研实验,严禁用于临床医疗及其他非科研用途!
产品名称:乙醇-乙酸固定液(3:1)
产品货号:GL0567
产品规格:500ml
用途:
固定细胞的原位杂交
注意事项:
主要由乙醇、乙酸组成,尤其适用于检测DNA。
储存条件:室温,12个月
除了乙醇-乙酸固定液(3:1),,我公司还供应以下相关产品:
名称:EDTA-柠檬酸钠抗原修复液(40X)
货号:YT082
规格:125ml
本品是一种常用的抗原修复液,结合了柠檬酸钠和EDTA进行抗原修复的优点,可以用于石蜡切片、冰冻切片等样品使用多聚甲*、甲醛或其它醛类试剂固定后的抗原修复。
细胞或组织用多聚甲*、甲醛或其它醛类试剂固定后,会导致蛋白之间的交联(cross-link),从而遮蔽样品的抗原位点,导致免疫染色时染色信号减弱,甚至出现一些假阳性染色结果。
本抗原修复液采用了常用的柠檬酸钠缓冲液和EDTA,结合了两者修复抗原的优点,并经过适当优化,可以更加有效地去除醛类固定试剂导致的蛋白之间的交联,充分暴露石蜡切片等样品中的抗原表位,从而大大改善免疫染色效果。
通常石蜡切片都需进行抗原修复处理,而冰冻切片可以不进行抗原修复处理。抗原修复会大大改善石蜡切片的免疫染色效果,但对于冰冻切片的染色效果很多文献资料表明也有显著改善。特别是当冰冻切片免疫染色效果欠佳时,可以考虑尝试进行抗原修复。从原理上来看,无论冰冻切片还是细胞爬片等,只要是用多聚甲*、甲醛或其它醛类试剂固定的样品,进行抗原修复都会有效去除蛋白之间的交联,充分暴露抗原表位,从而大大改善免疫染色效果。
本产品适用于石蜡切片,也可以用于冰冻切片等其它样品。
一个包装的本产品可以配制成5000毫升抗原修复液(1X)。按照每个片子需要10毫升抗原修复液(1X)计算,一个包装的本产品可以用于500个样品。
注意事项:
1. 抗原修复过程可以使用百奥莱博的染色缸和染色架或邮寄夹进行操作。塑料染色缸、染色架和邮寄夹可以很好地耐受沸水浴,而玻璃染色缸需避免骤冷骤热导致的玻璃破碎。
2. 本抗原修复液使用前必须用重蒸水或Milli-Q水稀释40倍,配制成抗原修复液(1X)。
3. 冻存的本产品需适当加热后才能完全溶解。同时由于本产品含有少量的特殊去垢剂,加热后会产生非常细密的气泡而呈现非常均匀的类似浑浊状,属于正常现象,并非不溶解或产生了沉淀。室温放置较长时间后,例如1-2天,溶液会完全澄清。对于溶解后呈现非常均匀的类似浑浊状的本产品,此时即可取适量稀释后使用。抗原修复过程中加热时也会产生非常细密的气泡而呈现均匀的浑浊状,也属于正常现象,请放心使用。
储存条件:4℃,有效期一年。
名称:封闭蛋白TBS缓冲系统封闭液
货号:ZN1914
规格:500ml
产品保存:4℃保存,一个月有效
产品特点:
1.相容性好,可用于其它的免疫检测封闭。
2.快速。
3.高信噪比,背景更干净。
名称:酪蛋白PBS缓冲系统封闭液
货号:ZN1916
规格:500ml
产品保存:4℃保存,一个月有效
产品特点:
1.相容性好,可用于其它的免疫检测封闭。
2.快速。
3.高信噪比,背景更干净。
名称:免疫组化试剂盒(山羊源一抗)
货号:ZN1843
规格:400T|800T|1600T
本试剂盒采用SABC系统,适于一抗为山羊来源抗体。SABC是专为免疫组化和其他免疫检测而设计的,用以显示组织和细胞中抗原分布。链霉亲和素对生物素分子有极高的亲和力,是一般抗原抗体亲和力的一百万倍,等电点 pI=6.0~6.5,对组织和细胞的非特异吸附很低。根据研究,SABC大约可形成一百个左右的过氧化物酶和五十个左右的链霉亲和素所构成的复合物。大量的酶可以保证SABC具有很高的敏感性。所以 SABC 兼具高敏感性,低背景和操作简便等优点。百奥莱博采用独特方法生产的SABC不仅有很强的信号放大作用,而且非常稳定。
试剂盒组成:
| 组分 | 规格 |
| 兔血清封闭液(效价1:10) | 2.5ml/5ml/10ml |
| 生物素标记兔抗山羊IgG(效价1:100) | 0.25ml/0.5ml/1ml |
| SABC(效价1:100) | 0.25ml/0.5ml/1ml |
附有三个滴瓶供稀释试剂用。稀释液可选用TBS或PBS缓冲液
保存条件:4℃可保存一年,应避免冷冻。
石蜡片染色步骤:
1. 石蜡切片,常规脱蜡至水。
2. 3%H2O2去离子水室温孵育5-10分钟,以 消除内源性过氧化物酶活性。PBS冲洗,5分钟×3次。
3. 根据需要选择抗原修复方式及强度。可热修复、酶修复或不修复。
4. 封闭。滴加兔血清封闭液(效价1:10),37℃孵育30分钟,甩干,勿洗。
5. 滴加一抗(山羊IgG),37℃孵育 1-2小时或4℃过夜。PBS冲洗,5分钟×3次。
6. 滴加生物素标记兔抗山羊IgG(效价1:100),37℃孵育30分钟。PBS冲洗,5分钟×3次。
7. 滴加 SABC(效价1:100),37℃孵育30 分钟。PBS冲洗,5分钟×3次。
8. 显色液显色,镜下控制反应时间。显色剂可选DAB(ZN1968)或AEC(ZN1963)。自来水充分冲洗。
9. 根据需要进行苏木素(ZN1971)复染,染色时间为0.5-2分钟。脱水,透明。
10. 选用中性树胶,水溶性封片剂(ZN2946)或其他适当的封片剂封片。
建议:
1. 热修复可选用枸橼酸盐缓冲液(ZN1955)、EDTA抗原修复液(ZN1951)、PBS缓冲液、TBS缓冲液(ZN1953)等作为抗原修复液。
2. 酶修复可选用复合修复液(ZN1952)、抗原修复液Ⅰ(ZN1954,与热修复配合使用)、胰蛋白酶(ZN2944)、胃蛋白酶(ZN2945)消化组织。
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文献和实验备用(在棕色瓶中4℃可保存两周)。 (2)电极液:阳极1mol/L磷酸(H3PO4):原磷酸试剂的浓度约为16mol/L,故配制时用重蒸水稀释16倍即可。 阴极 1mol/L氢氧化钠(NaOH):称取4g固体溶于100ml重蒸水中。 (3)固定液:甲醇35ml,三氯乙酸10g,磺基水杨酸3.5g加水定容到100ml。 (4)染色液:乙醇35ml,冰乙酸10ml,考马氏亮蓝R2500.1g加水定容到100ml,溶解后过滤备用。 (5)脱色液:乙醇25ml,冰乙酸10ml,加水
的时候出问题了 细胞估计已经破裂 固定时候应该缓慢添加固定液 有的时候固定液就是用PBS和无水乙醇配置的。 Fasta921 我做的步骤:接种适当浓度细胞于培养皿中,培养过夜后,经0.25%胰蛋白酶消化,冷磷酸盐缓冲液(PBS)洗涤后离心,用70%(体积分数)预冷乙醇悬浮细胞于-20度固定过夜后,离心收集细胞,用PBS洗3次去除乙醇,细胞团重悬于PBS中,用20 μg/ml含RNaseA的碘化丙啶PI染色液避光染色30 min,经100目尼龙
标的最常用固定剂。甲醛介导的组织固定被认为依赖于蛋白质-蛋白质和蛋白质-核酸交联的形成,这些交联涉及亚甲基桥(-CH₂- )。甲醛可以化学连接氨基(NH₂ )和肽键(CONH)、氨基(NH)和氨基(NH)或氨基(NH)和氨基( NH₂ )。 甲醛是大多数免疫组化/免疫细胞化学应用中的良好选择,但并非万能固定剂。甲醛过度固定会改变表位中的氨基酸,从而阻碍抗体与其结合。然而,在大多数情况下,可以通过抗原修复技术暴露表位,恢复抗体结合。在这种情况下,冰冷的无水甲醇或无水乙醇是合适的替代固定剂。 注
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