细胞核/浆蛋白抽提试剂盒

特别提示：包括细胞核/浆蛋白抽提试剂盒在内，本公司的所有产品仅可用于科研实验，严禁用于临床医疗及其他非科研用途！

产品名称：细胞核/浆蛋白抽提试剂盒
英文名称：Nuclear and Cytoplasmic Extraction Kit
产品货号：WE0265
产品规格：50次

  本试剂盒能够简单、快速的提取来源于哺乳动物细胞及组织的细胞核和细胞浆蛋白，所提取蛋白保持生物学活性。本试剂盒首先通过细胞浆蛋白抽提试剂裂解细胞膜，释放细胞浆蛋白，然后通过离心得到细胞核沉淀。zuì后通过细胞核蛋白抽提试剂抽提得到细胞核蛋白。抽提获得的核蛋白及浆蛋白纯度高，有效避免核/浆蛋白的交叉污染，可以用于Western、Gel Shift、报告基因检测以及酶活力测定等后续操作。

试剂盒组成：

组份	50次
Buffer A	50ml
Buffer B	3ml
Buffer C	25ml
Protease Inhibitor Cocktail	750μl

保存条件：Protease Inhibitor Cocktail：-20℃，其它组分：2～8℃

注意事项：
1、如需提取磷酸化蛋白请在抽提试剂中加入磷酸酶抑制剂。
2、所有样品操作请置于冰上进行。
3、可根据具体实验情况调整试剂用量，保证各试剂使用比例为Buffer A:Buffer B:Buffer C=100:5.5:50。
4、可以采用更高的速度来离心。

使用方法：

一、细胞中胞浆、胞核蛋白的提取
1、请在蛋白抽提前取出抽提试剂Buffer A和Buffer C进行预冷
2、收集细胞，计数。离心去上清。
3、1×107细胞中加入1ml Buffer A(按照1:99比例在蛋白抽提前2-3分钟内加入Protease Inhibitor Cocktail)，涡旋5秒以充分混匀，冰上孵育20分钟。
注意：各种细胞的特性不同，需要根据不同细胞的特性调整Buffer A的用量，如果蛋白浓度小，按比例减少Buffer A及后续Buffer B、Buffer C的用量。
4、加入55μl Buffer B，涡旋5秒以充分混匀，冰上孵育 1分钟。
5、4℃ 12000rpm(~～13400×g)离心 15分钟，收集上清(尽量收集干净上清液)至新的离心管中，-20℃保存(此提取液为胞浆蛋白)。
6、向上步所得的沉淀中加入500μl Buffer C(使用前按照1:99比例加入Protease Inhibitor Cocktail)，涡旋5秒以充分混匀，重悬沉淀，冰上孵育40分钟，每隔10分钟涡旋混匀一次，每次约15-30秒。
7、4℃ 12000rpm离心15分钟，收集上清(尽量收集干净上清液)至新的离心管中，-20℃保存(此提取液为胞核蛋白)。

二、组织中胞浆、胞核蛋白的提取
1、取材，保存组织。
2、在蛋白抽提前取出抽提试剂Buffer A和Buffer C进行预冷。
3、称组织重量，每100 mg组织中加入1ml Buffer A(按照1:99比例在蛋白抽提前2-3分钟内加入Protease Inhibitor Cocktail)，用匀浆器在冰上充分匀浆，放置在冰上孵育20分钟。
注意：各种组织的特性不同，需要根据不同组织调整Buffer A的用量，如果蛋白浓度小，按比例减少Buffer A及后续Buffer B、Buffer C的用量。
4、加入55μl Buffer B，涡旋5秒以充分混匀，放置在冰上孵育 1分钟。
5、4℃ 12000rpm离心 15分钟，收集上清(尽量收集干净上清液)至新的离心管中，-20℃保存(此提取液为胞浆蛋白)。
6、向上步所得的沉淀中加入500μl Buffer C(使用前按照1:99比例加入Protease Inhibitor Cocktail)，涡旋5秒以充分混匀，重悬沉淀，冰上孵育40分钟，每隔10分钟涡旋混匀一次，每次约15-30秒。
7、4℃ 12000rpm离心15分钟，收集上清(尽量收集干净上清液)至新的离心管中，-20℃保存(此提取液为胞核蛋白)。

储存条件：-20℃

除了细胞核/浆蛋白抽提试剂盒,，我公司还供应以下相关产品：



名称：His标签蛋白专用蛋白酶抑制剂
货号：BTN130530
规格：10mL
His-Ni亲和层析是目前分离纯化重组表达蛋白质的重要方法，纯化过程中，为防止各种蛋白酶降解重组蛋白，需要加入足够、特异的蛋白酶抑制剂。本产品即为优化的His标签蛋白蛋白酶抑制剂混合液。专门用于纯化His标签蛋白时，抑制各种内源和外源蛋白酶活性，防止重组表达蛋白质降解。本品抑制谱广，能特异性抑制丝氨酸蛋白酶、半胱氨酸蛋白酶、天门冬氨酸蛋白酶、嗜热菌蛋白酶样蛋白酶和氨基肽酶等各种蛋白酶活性。本产品为DMSO溶液。与各种细菌细胞裂解液兼容，在裂解液中加入1/100体积即可。

储存条件：低温运输，-20℃保存，有效期两年。

名称：植物蛋白提取试剂盒
货号：WE0264
规格：25次|100次
  本试剂盒可从新鲜、冰冻或干燥植物组织中提取可溶性植物蛋白。适用于多种植物及植物的不同部位(如根、茎、叶、花、种子等)蛋白提取，高效提取植物蛋白，比传统的方法提取蛋白产量大、活性高、速度快。所提蛋白可直接进行蛋白电泳分析、免疫沉淀、Western Blot、蛋白活性测定及蛋白纯化等实验。所提蛋白可用BCA蛋白定量试剂盒(货号：WE0276)进行浓度的测定。

试剂盒组成：

组份	25次	100次
Plant Protein Extraction Reagent	25ml	100ml
Protease Inhibitor Cocktail	250μl	1ml

保存条件：Protease Inhibitor Cocktail：-20℃，其它组分：室温

注意事项：
1、本品含有1mM EDTA。
2、为防止蛋白降解，所有的操作尽量在冰上进行。
3、使用本产品提取蛋白后，可采用BCA法进行蛋白定量。
4、为了获得实验zuì佳效果，请根据实验调整zuì佳使用量。

使用方法：
1、请在蛋白抽提前取出实验所需Plant Protein Extraction Reagent进行预冷。
2、称量试验植物组织的重量。按照1 g组织加入5ml Plant Protein Extraction Reagent(在蛋白抽提前按照1:99比例加入Protease Inhibitor Cocktail)。
注意：
1)匀浆前将大块的植物组织剪成小块，机械匀浆器匀浆10 s，间歇10 s，反复三次进行裂解，根据组织样本不同选用适合的匀浆方式。
2)裂解液的使用量依据植物不同部位进行调整，若需要浓缩的蛋白提取物，可适当减少Plant Protein Extraction Reagent使用量。
3、匀浆后冰上孵育20-30分钟。
4、4℃ ～13400×g，离心20分钟。
5、收集上清中的可溶性蛋白，进行下一步的纯化或下游分析。

储存条件：-20℃