蛋白上样缓冲液(还原，5X)

特别提示：包括蛋白上样缓冲液(还原，5X)在内，本公司的所有产品仅可用于科研实验，严禁用于临床医疗及其他非科研用途！

产品名称：蛋白上样缓冲液(还原，5X)
英文名称：The protein sample buffer

产品货号：蛋白上样缓冲液(还原，5X)
产品规格：10ml



除了蛋白上样缓冲液(还原，5X),，我公司还供应以下相关产品：



名称：辛甲基β葡糖苷
货号：BTN131044
规格：1g
本产品是一种广泛用于溶解膜蛋白的非离子型去垢剂。低分子量，可通过透析去除。

储存条件：常温运输和保存，有效期一年。

名称：RIPA裂解液(强)
货号：YT609
规格：100ml
本品是一种传统的细胞组织快速裂解液。RIPA裂解液裂解得到的蛋白样品可以用于常规的Western、IP等。RIPA的本意是Radio Immunoprecipitation Assay。RIPA裂解液的配方有很多种，根据其裂解液的强度大致可以分为强、中、弱三类。

RIPA裂解液(强)的主要成分为50mM Tris(pH 7.4)，150mM NaCl，1% Triton X-100，1% sodium deoxycholate，0.1% SDS，以及sodium orthovanadate，sodium fluoride，EDTA，leupeptin等多种抑制剂。可以有效抑制蛋白降解。

用RIPA裂解液裂解得到的蛋白样品，可以用百奥莱博的BCA蛋白浓度测定试剂盒(YT036，YT037)测定蛋白浓度。由于含有较高浓度的去垢剂，不能用Bradford法测定由本裂解液裂解得到样品的蛋白浓度。

储存条件：-20℃，有效期一年。

名称：RIPA裂解液(低强度)
货号：SNM387
规格：100ml

名称：WB二抗稀释液
货号：SNM433
规格：100ml

名称：1M Tris(pH6.8)
货号：RFT062
规格：100ml|500ml
本品用于SDS-PAGE浓缩胶制备。

名称：牛纤维蛋白原
货号：SY0390
规格：1g
纤维蛋白原（Fibrinogen，Fg），即凝血因子I，分子量约340kDa，由α、β、γ三对不同多肽链组成，多肽链间以二硫键相连。α链分子量63.5 kDa，β链分子量56 kDa，γ链分子量47kDa，纤维蛋白原约含4%碳水化合物。

纤维蛋白原参与凝血的原理：在凝血酶作用下，α链与β链分别释放出A肽与B肽，生成纤维蛋白单体。在此过程中，由于释放了酸性多肽，负电性降低，单体易于聚合成纤维蛋白多聚体，但此时单体之间借氢键与疏水键相连，尚可溶于稀酸和尿素溶液中。进一步在Ca2+与活化的ⅩⅢ因子作用下，单体之间以共价键相连，则变成稳定的不溶性纤维蛋白凝块，完成凝血过程。

来源于不同物种（如来源于牛、猫、狗、豚鼠、人、绵羊、小鼠和大鼠等）的纤维蛋白原具有相似的结构和性质。因此，一般来源于一种哺乳动物的纤维蛋白原可与其他来源的凝血酶交叉反应，相反地来自一种哺乳动物蛋白的凝血酶液也可注入多种动物，发生凝血反应。

英文别名：Factor-1
CAS：9001-32-5
外观：白色至类白色粉末
纯度clottable protein：＞85%
溶解性：溶于0.9%生理盐水（10mg/ml），不溶于水
储存条件：-20℃，有效期4年

注意事项
1）纤维蛋白原一般应采用37℃的生理盐水溶解，溶解时温度不宜过低，在4℃条件下以及不含盐的溶液中难以溶解。注意纤维蛋白原溶液在50℃以上变性，因此加热温度不宜超过50℃。
2）为了您的安全和健康，请穿实验服并戴一次性手套操作。

储存液配制
牛纤维蛋白原可溶于0.9% NaCl溶液，配制成2.5-10mg/ml的溶液于-20℃冻存，无菌过滤后可稳定保存约1周。
【注】
① 溶解时将本品缓慢置于37℃预热的生理盐水，可轻轻搅动使其慢慢溶解，不可旋涡震荡！
② 过滤时建议用0.2µm滤膜过滤，不可用0.1µm滤膜。可使用注射器缓慢过滤，不可用真空过滤。


名称：ECL化学发光法检测试剂盒(兔IgG)
货号：QN1157
规格：1盒
本试剂盒主要用于western blotting的化学发光显色，含有HRP标记抗兔IgG二抗。

SDS-PAGE电泳后，蛋白质按照分子量大小分离，转移到固相载体(例如硝酸纤维素薄膜)后，固相载体以非共价键形式吸附蛋白质，以固相载体上的蛋白质或多肽作为抗原，与对应的抗体起免疫反应，再与酶标记的第二抗体起反应，加入发光底物后，能让胶片感光。经显影和定影后，可以在胶片上显示出条带(抗原所在位置)。

试剂盒组分：
封闭试剂———————————30g(可配制400ml)
10倍浓缩抗体稀释液——————50ml
HRP标记兔IgG二抗———————0.3ml，效价1:500～1000
ECL显色液-——————————25mlA+25mlB

常规电泳转膜后:
1)清洗转印膜：将膜剥离下后，作好标记，一般在左上角剪一缺口。室温用TBS-T漂洗3次每次5min,以尽量洗去转印膜上的SDS，防止影响后面的抗体结合。
2)按5g封闭试剂加100ml双蒸水计，配制膜封闭液，配好的膜封闭液为乳白色悬液，将漂洗过的转印膜放入封闭液内，置摇床孵育，室温封闭30min。用TBS-T缓冲液(PH7.6)洗膜，室温漂洗3次每次5min。
3)将10×抗体稀释液用双蒸水稀释成1×(10ml,10×抗体稀释液加入90ml双蒸水，混匀，可4℃保存三个月)。此稀释液可作为一抗和二抗的稀释液。
4)用1×的抗体稀释液稀释一抗。根据用量以及一抗的推荐稀释浓度来稀释一抗。将杂交膜放入杂交袋中，加入一抗工作液，封口，4℃孵育过夜或37℃摇动孵育2h。此用过的抗体一般可回收第二天再使用一次。
注：如果所加一抗不同，可在此步将膜沿电泳方向剪成条，分别作好标记，分开孵育。
5)用TBS-T缓冲液(PH7.6)洗膜，室温漂洗3次每次5min。
6)用1×的抗体稀释液稀释二抗。根据用量，按10ml抗体稀释液加入15ul的HRP标记二抗的比例，配制二抗工作液。将杂交膜放入杂交袋中，加入二抗工作液，封口，37℃摇动孵育1h。此用过的抗体一般可回收第二天再使用一次。
7)用TBS-T缓冲液(PH7.6)洗膜，室温漂洗3次每次10min。
8)根据用量，取ECL发光液A、B等量混匀，加在膜正面，暗室显色1～5分种。倾去显色液，小心用纸吸去显色液，在上面盖一层平整的透明纸。再取出感光胶片，做好标记，轻轻的放在膜上，显色30秒到1分钟，取出胶片浸入显影液中，观察显色情况，再放入定影液中1分钟。根据条带强弱，再次感光时可减短或者加长感光时间(从5秒到30分钟)以期达到理想结果。
注意事项：
1.请根据一抗来源选择试剂盒。
2.可以根据显色结果来优化实验反应时间。如背景过深，可延长膜封闭时间，加长最终漂洗次数与时间。如果
条带过弱，可增加抗体浓度，可延长抗体孵育时间或加长感光时间。
3.TBS-T(0.01M，PH7.6)配制方法：称取NaCl 8.5g，Tris 1.21g，用800ml的双蒸水溶解，用盐酸调PH到7.6，再加入0.5ml Tween-20，用双蒸水加至1000ml，混匀即可。(也可按照自己的配制习惯来配制)

储存条件：-20℃避光，有效期一年。