JC-10线粒体膜电位检测试剂盒

特别提示：包括JC-10线粒体膜电位检测试剂盒在内，本公司的所有产品仅可用于科研实验，严禁用于临床医疗及其他非科研用途！

产品名称：JC-10线粒体膜电位检测试剂盒
产品货号：HR0418
产品规格：20T/50T/100T

线粒体与细胞凋亡密切相关，其中线粒体跨膜电位(△Ψmt)的破坏，被认为是细胞凋亡级联反应过程中最早发生的事件之一，它发生在细胞核凋亡特征(染色质浓缩、DNA 断裂)出现之前，一旦线粒体跨膜电位崩溃，则细胞凋亡不可逆转。
线粒体膜电位(mitochondrial membrane potential)△Ψm的下降是细胞凋亡早期的一个标志性事件，常用JC-1或JC-10 来检测。虽然JC-1在许多实验中被广泛地的应用，但是其水溶性差的特性也使其很难在一些实验中使用，即使是在浓度为1uM的条件下，JC-1 也会在水的缓冲液中析出。JC-10 是一种可以在需要高浓度染料的实验中替代JC-1的产品，与JC-1相比，JC-10 具有更好的水溶性。
JC-10可以选择性的进入线粒体，并且由于膜电位的增加，其颜色会发生从绿色到橙红色的可逆性改变。这种特性是由于JC-10 聚合物的可逆结构，在膜电位增加的条件下，它的发射光由520nm(JC-10 单体发射光)转移到570nm(JC-10 聚合体发射光)。当在490nm处激发时，JC-10发生从绿色到橙红色的可逆改变，因为线粒体膜极化的更大。这两种颜色都可以被流式细胞仪上装好的一般滤光器检测到，因此绿色发射光可以通过荧光通道1(FL1)进行分析，橙红色发射光可以通过荧光通道2(FL2)进行分析。它除了可以用于流式细胞术，也可以用于荧光成像分析。在一些细胞系中JC-10有着比JC-1 更好的表现，不过，JC-10的性能表现对细胞系极具依赖性。
JC-10溶解于DMSO溶液中。JC-10可以检测细胞、组织或纯化的线粒体膜电位。正常细胞内，在线粒体膜电位较高时，JC-10 选择性聚集在线粒体基质中形成可逆的橙红色荧光聚合物(Ex=510nm/ Em=570nm)，在488nm 激发时的最大发射波长为570nm，可以产生橙红色荧光；当细胞发生凋亡时，线粒体膜电位较低，发生膜电位的下降或丧失，JC-10 不能聚集在线粒体的基质中，JC-10由多聚体转变为绿色荧光单体(Ex=510nm/Em=520nm)形式存在于胞浆中，在488nm 激发时最大发射波长为520nm，可以产生绿色荧光，形成流式图中细胞FL1阳性。凋亡细胞则大多为FL1单阳性。这样就可以非常方便地通过荧光颜色的转变来检测线粒体膜电位的变化。常用红绿荧光的相对比例来衡量线粒体去极化的比例。
通过JC-10 从橙红色荧光到绿色荧光的转变可以很容易地检测到细胞膜电位的下降，同时也可以用JC-10 从橙红色荧光到绿色荧光的转变作为细胞凋亡早期的一个检测指标。
JC-10线粒体膜电位检测试剂盒可以快速灵敏地检测细胞、组织或纯化的线粒体膜电位变化，可以用于早期的细胞凋亡检测。试剂盒染料与其他的阳离子染料如DiOC6(3)和罗丹明123相比，特异性更高，对线粒体膜电位变化的特异性高于质膜电位变化，对线粒体去极化检测的检测一致性更好；红绿色荧光强度比率只受线粒体膜电位的变化，不受线粒体大小，形状，密度的差异干扰；检测灵敏度强，对细胞应激反应的微小异质性都能辨别。

储存条件：JC-10染液-20℃避光保存；避免反复冻融，可根据需要小量分装。10×染色缓冲液2-8℃保存。
有效期：一年。

※ ※ ※ 使用前请仔细阅读产品说明书 ※ ※ ※
使用限制：本试剂盒仅供科学研究使用，不可用于诊断或治疗。
产品更新：我公司会更新或升级产品，以优化和增强其使用性能，产品说明书会进行相应的版本更新。使用产品时，请参照随产品附带的说明书，不要参照网上下载的说明书，可能是不同的版本。需要最新电子版说明书时可以在收到产品后发邮件索取。
使用安全：使用时需要合适的实验室外套，一次性手套。避免皮肤或粘膜与试剂接触。如果试剂不小心接触皮肤或眼睛，应立即用水冲洗。

注意事项：
● 螺旋盖微量试剂管装的试剂在开盖前请短暂离心，将盖和管内壁上的液体离心至管底，避免开盖时试剂损失。
● 禁止与其他品牌的试剂混用，否则会影响使用效果。
● 样品或试剂被细菌或真菌污染或试剂交叉污染可能会导致错误的结果。
● 最好使用一次性吸头、管、瓶或玻璃器皿，可重复使用的玻璃器皿必须在使用前清洗并彻底清除残留清洁剂。
● 实验后完成后所有样品及接触过的器皿应按照规定程序处理。

试剂盒以外自备试剂和仪器：
● PBS ● 纯水 ● 移液器及吸头 ●离心机 ● 流式细胞仪或荧光显微镜

使用方法：

使用注意事项：
● 螺旋盖微量试剂管装的试剂在开盖前请短暂离心，将盖内壁上的液体收集至管底，避免开盖时液体洒落。
● 冬天JC-10在温度较低时会凝固，可以20～25℃水浴温育片刻全部融解后离心使用。
● JC-10可以根据实验安排小量分装后，每次使用一管。
● 细胞处理需要小心操作,尽量避免人为的损伤细胞。
● 始终保持平衡染液中pH 值的一致性，因为pH 值的变化将影响膜电位。
● 与染料达到平衡的细胞悬液中如果含有蛋白，他们将与部分染料结合，降低染料的浓度，引起假去极化。
● 根椐细胞种类、实验条件不同流式细胞仪设置不同。
● JC-10染色并洗涤后尽量在30分钟内完成后续检测。在检测前需冰浴保存。
悬浮细胞
1．1×染色缓冲液和JC-10染色工作液的配制：
根据样品数按下列比例配制1×染色缓冲液和JC-10染色工作液。取100μl 10×染色缓冲液加900μl 无菌纯水稀释，混匀并预热至37℃，即成1×染色缓冲液；
用1×染色缓冲液将JC-10 稀释1000-3000倍，充分混匀配成JC-10染色工作液。
【注】：
● 也可以使用HHBS(1×Hanks with 20 mM Hepes buffer,pH 7.0)或其他缓冲液(pH 7.0-7.5)1000-3000倍稀释JC-10染色液配制1×JC-10染色工作液，涡旋混匀。
2．收集样本细胞以及阴性、阳性对照细胞。细胞数量在2-5×105个。
【注】：
● 此处以流式检测为例。如果用荧光酶标仪检测，将100μl染色工作液加入96孔板中染色即可。
3．用PBS洗涤细胞两次。离心收集细胞。
4．用500μl JC-10染色工作液将细胞重悬，37℃，5% CO2的培养箱中孵育15-60分钟。
【注】：
● 具体孵育时间取决于细胞类型和细胞浓度。实验前建议根据所需检测的样本优化实验体系。
5．用流式细胞仪或荧光分光光度计检测分析结果，或者用荧光显微镜或激光共聚焦显微镜观察结果。
贴壁细胞
对于贴壁细胞，可以先收集细胞，重悬后参考悬浮细胞的检测方法。
纯化线粒体
1．把配制好的JC-10染色工作液再用1×染色缓冲液稀释5倍。
2．在0.9mL 5倍稀释的1×JC-10染色工作液中加入0.1mL 总蛋白量为10～100μg的纯化的线粒体。
3．结果检测。
组织样本
组织样本可以用玻璃匀浆器匀浆成单细胞悬液后按照细胞样本的方法检测。也可以用其他细胞悬液制备的试剂盒处理组织后检测。

结果分析：
检测JC-10 单体时可以把激发光设置为490nm，发射光设置为520-530nm；检测JC-10聚合物时，可以把激发光设置为525-540nm，发射光设置为570-600nm。
用流式细胞仪检测细胞凋亡的情况，绿色荧光通过FL1 通道检测；红色荧光通过FL2通道检测。FL-1+,FL-2+为正常细胞，FL-1+,FL-2-为凋亡细胞。也可以计算红色荧光信号与绿色荧光信号的比值，用来判断细胞健康程度。
用荧光显微镜或激光共聚焦显微镜观察：
检测JC-10 单体时可以参考观察其它绿色荧光时的设置，如观察GFP或FITC时的设置(FITC 通道)；检测JC-10 聚合物时可以参考观察其它红色荧光，如PI或Cy3时的设置(TRITC 通道)。
出现绿色荧光说明线粒体膜电位下降，并且该细胞很可能处于细胞凋亡早期。出现红色荧光说明线粒体膜电位比较正常，细胞的状态也比较正常。
用荧光分光光度计或荧光酶标仪检测：
激发波长为485nm，发射波长为590nm。如果使用荧光酶标仪，激发波长不能设置为485nm时，可以在475～520nm 范围内设置激发波长。
阳性对照的设置
一般不需要设置，如果要制备阳性对照细胞，可以用去极化药物羰基*化物间氯*腙CCCP 作为诱导线粒体膜电位下降的阳性对照。
按以下方法操作：CCCP 加入到细胞培养液中，终浓度10uM，处理细胞20分钟。随后进行线粒体膜电位的检测。对于大多数细胞，通常10μM CCCP 处理20分钟后线粒体的膜电位会完全丧失，JC-10染色后观察应呈绿色荧光；而正常的细胞经JC-10染色后应显示红色荧光。对于特定的细胞，CCCP的作用浓度和作用时间可能有所不同，需自行参考相关文献资料决定。

除了JC-10线粒体膜电位检测试剂盒,，我公司还供应以下相关产品：
 

货号	名称	规格
YT119	细胞凋亡阳性对照试剂盒	200次
YT123	台盼蓝染色细胞存活率检测试剂盒	100次
YT137	TUNEL细胞凋亡检测试剂盒(显色法)	20次|50次
WE0325	Annexin V-FITC/PI细胞凋亡检测试剂盒	50次
KFS205	Caspase 6荧光法检测试剂盒(AFC)	20T|50T|100T
SY0477	TUNEL细胞凋亡检测试剂盒(Alexa Fluor 647)	20 rxn
SY1065	p53抑制剂(PFT-α)	5mg
ZN1530	细胞凋亡检测试剂盒Ⅱ(AP)	20T
QN1291	CCCP细胞凋亡诱导剂(50mM)	100ul
QN1308	MTT细胞增值与毒性检测试剂盒	500T
QN1314	*啶橙-EB双染色试剂盒	50ml*2|250ml*2
QN1315	细胞凋亡Hoechst 33342/PI双染试剂盒	100T|500T
HR8278	线粒体绿色荧光染色试剂盒	100T
HR8285	Annexin V-APC/7-AAD细胞凋亡检测试剂盒	50T/100T
HR0476	Caspase 4抑制剂	200μl
HR0497	XTT细胞增殖及细胞毒性检测试剂盒	250T/500T/1000T
HR0503	细菌活性检测试剂盒-CCK8	250T/500T/1000T
HQF04	Tunel细胞凋亡检测试剂盒（POD）	10次/20次/50次