pCR3.1哺乳表达质粒

CRISPR-Cas9 基因敲除 sgRNA 设计好之后

的表达质粒。A）PCR 扩增的方法U6：来源于人 U6 小核启动子，常用小 RNA 表达，转录本为 shRNA。将 sgRNA 放到 U6 后面，利用 U6 的启动来扩增 sgRNA。将这部分内容整合到 Cas9 expression plasmid pSpCas9（Cas9 表达质粒）中，一起共转。B）sgRNA 表达质粒的方法现在我要用这个方法来举例设计 p53 引物找到包括 sgRNA 序列的前后 1000 个碱基的序列（2000 bp）找到的序列如下：将上面复制的序列粘贴到 blast 中

献给初学者：如何在细胞中稳定表达基因

作为细胞生物学专业的博士生，在基因功能研究上已经有五年的经验了，今天我给大家讲讲其中经常用到并且非常重要的一种技术--慢病毒包装的过表达体系。下面我就从引物设计，慢病毒表达质粒构建等方面详细讲述。下面以 plex-MCS 载体为例。1. 选择酶切位点，为了避免移码突变，上游的酶切位点选择起始密码子 ATG 前面的 spel，下游选择 xho1。2. 构建方法的选择。连接法对于连接法，首先设计引物将目的基因 PCR 出来，即酶切位点加基因引物，此时应注意，为了防止酶切将基因破坏，通常习惯在两端

【交流】构建ShRNA表达质粒咋就那么难？

到医院实习之前，我有幸跟随我的恩师，利用课余时间做了两年多的基础科研。从不懂规矩到渐入佳境，期间学习了很多东西，在此感谢我的恩师！ 我们是生物化学教研室，这两年的时间里我做了很多生化方面的实验。像细菌培养、细胞培养、PCR、western-blot、MTT测细胞增殖能力，这些实验都有商品化的试剂和推荐的操作方法，做起来，难度并不大。唯独让我感到苦恼的就是ShRNA表达质粒的构建这部分，它耗费了我们很多的精力，虽然最终取得了成功，也发表了论文。但是显然，这个实验的可重复性并不