pET28a-TEV蛋白酶基因质粒

【原创】taq酶表达的一些个人经验

个酶切位点，载体上还有1个卡那霉素(Kan)的筛选标记。重组的Taq DNA聚合酶基因通过NdeI和Xhol双酶切克隆在表达质粒pET-28a多克隆位点上。 宿主菌为BL21(DE3)。菌株，即宿主菌BL21经噬菌体DE3溶源化后，DE3的lacUV5强启动子及位于其下游的T7 RNA聚合酶基因被整合到宿主菌的基因组DNA中。宿主菌在非代谢性乳糖类似物IPTG的诱导作用下能产生大量的T7RNA聚合酶，而T7RNA聚合酶能特异性地识别Pet-28a表达载体中的T7启动子序列，从而高效地表达目的重组蛋白

【求助】请教大家一个关于报告基因质粒瞬时转染与报告基因表达的问题，问题比较长，谢谢

序列（并非转录因子基因）和荧光素酶报告基因，就算你说的质粒能表达出转录因子能入核与核内调控序列结合启动后续基因表达，可是核内并未整合有外源的荧光素酶基因，又怎么表达出荧光素酶呢？这部分的分子知识我很欠缺，也许我钻牛角尖了，可是我确实没弄明白，希望woxingwosu能不吝赐教，帮我搞清楚这个问题，非常谢谢！ lsdcfhyj 我在想在瞬时转染报告基因分析中，是不是转录因子也可以与细胞质中的质粒上的调控序列作用调控荧光素酶基因表达出蛋白质，这样似乎说得过去

一种优化的PCR 方法——降落PCR 扩增目的基因

温度越来越低[2 ] ,从而达到最佳扩增条件的方法。我们在构建人 CD137 - hIgG1Fc - pCDNA3 融合蛋白真核表达载体以及在检测HBV DNA 多聚酶基因突变的过程中运用降落PCR 进行了扩增目的基因的尝试。1 　材料和方法1.1 　质粒含有人CD137 全长cDNA 序列的pCDNA3 质粒(CD137 - pCDNA3) ,由Herbert Schwarz 教授惠赠; 含hIgG1 FccDNA的PGEM - T质粒由第二军医大学曹雪涛教授惠赠; HBV DNA ,从6 位慢性HBV 感染者血清