HLTV-hTRIM21人源基因质粒

【专题讨论】原核表达秘笈之宿主菌株的选择！（接原原核表达研究者关心的10个问题贴）

表达真核基因的时候，真核基因中的一些密码子对于原核细胞来说可能是稀有密码子，从而导致表达效率和表达水平很低。改造基因是比较麻烦的做法，Rosetta 2系列就是更好的选择——这种携带pRARE2质粒的BL21衍生菌，补充大肠杆菌缺乏的七种（AUA, AGG, AGA, CUA, CCC, GGA 及CGG）稀有密码子对应的 tRNA，提高外源基因、尤其是真核基因在原核系统中的表达水平。（已经携带有氯霉素抗性质粒）。 当要表达的蛋白质需要形成二硫键以形成正确的折叠时，可以选择K–12衍生菌

如何阅读质粒图谱

载体主要有病毒和非病毒两大类，其中质粒DNA是一种新的非病毒转基因载体。 一、一个合格质粒的组成要素 复制起始位点Ori，即控制复制起始的位点。原核生物DNA分子中只有一个复制起始点。而真核生物DNA分子有多个复制起始位点。 抗生素抗性基因：可以便于加以检测，如Amp+ ，Kan+ 多l克隆位点：MCS克隆携带外源基因片段 P/E：启动子/增强子

慢病毒包装系统简介及应用

成分与包装成分互补，含有包装、逆转录和整合所需的 HIV 21顺式作用序列。同时具有异源启动子控制下的多克隆位点及在此位点插入的目的基因。为降低两种成分同源重组产生有复制能力的病毒 （RCV）的可能性，将包装成分的 5′ LTR 换成巨细胞病毒（CMV）立即早期启动子，3′ LTR 换成 SV 40 polyA 位点等。将包装成分分别构建在两个质粒上，即一个表达 gag 和 pol、另一个表达 env。根据这个原理，Naldini 和 Kafri 等构建了三质粒表达系统。