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- Xybio
- 上海
- P2670
- 2025年07月13日
企业认证
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- 详细信息
- 文献和实验
- 技术资料
- 保存条件：
-20
- 保质期：
2年
- 英文名：
Plasmid#104973;RNF81RO52Ro/SSASSASSA
- 库存：
100
- 供应商：
上海烜雅生物科技有限公司
- 规格：
干粉/液体
名称：HLTV-hTRIM21人源基因质粒
别称: Plasmid#104973;RNF81RO52Ro/SSASSASSA
复制子: pBR322
原核抗性: Amp
克隆菌株: DH5a
培养条件: 37度
质粒属性
载体宿主：大肠杆菌
载体用途：蛋白表达
基因种属：人
基因类型：ORF
原核抗性：Amp
真核抗性：
荧光蛋白：
质粒简介
质粒图谱
质粒序列：详询
质粒菌株产品操作说明书
一、扩增流程
收到产品后，请先根据产品管壁标签来判断产品形式，并在扩增前准确查找该质粒菌株的抗性、感受态和培养温度。
1、质粒干粉（常温运输，存于-20度，90天保质期，请务必转化挑单克隆培养，不要直接使用和测序）
①收到质粒干粉后请先5000rpm离心1min，再加入20μl ddH2O去离子水溶解质粒；
②取1支100μl 感受态于冰上解冻10min，加入2μl质粒，再冰浴30min后，42℃热激60s，不要搅动，再冰浴2min；（从第二步开始均要在超净工作台中无菌操作）
③加入900μl无抗的LB液体培养基，180rpm震荡37℃培养45min；
④6000rpm离心5min，仅留100μl上清液重悬细菌沉淀，并涂布至目标质粒抗性的LB平板上；（可使用本平台的平板涂布专用玻璃珠进行涂布，可以比传统涂布方法获得更多转化子）
⑤将平板正向培养1h，再倒置37℃培养14h。如果要求是30度则培养20h；
（菌落过多则将质粒稀释后再转化。没有菌落则加入10μl质粒转化。另不要直接转表达感受态，要先转克隆感受态，重提质粒后再导入表达感受态）
⑥挑取单菌落至LB液体培养基中，加入对应抗生素，220rpm震荡培养14h，根据实验需要和质粒提取试剂盒说明书提取质粒。
2、甘油菌种（冰袋运输，存于-80℃，保质期90天，请务必划线挑单克隆培养）
四区划线后挑单菌落培养，酵母菌需要先液体复苏再四区划线，再挑单菌落液体培养。
3、穿刺菌种（冰袋运输，存于4℃，保质期7天）
穿刺接种，液体培养后四区划线，再挑单菌落液体培养。
4、菌落平板（冰袋运输，存于4℃，保质期7天）
直接挑取单菌落至液体培养基中。
5、液体质粒（冰袋运输，存于-20℃，保质期90天）
单独提取的液体质粒收到后可直接使用。
6、滤纸质粒（常温运输，存于-20度，90天保质期，请务必转化挑单克隆培养，不要直接使用和测序）
收到货后将滤纸画圈部分剪下放入EP管中，加100ul无菌水将滤纸浸湿并浸泡5min，吸取5ul质粒转化，离心全涂。
二、转化图片
| P3858/pCMV-SPORT6-IL24人源基因质粒 |
| P3859/pCMV-SPORT6-DEPTOR（2点突变）人源基因质粒 |
| P3860/pCMV-SPORT6-ATP5F1A人源基因质粒 |
| P3861/pCMV-SPORT6-PGAP3人源基因质粒 |
| P3862/pCMV-SPORT6-GAK人源基因质粒 |
| P3863/pCMV-SPORT6-SLC46A1人源基因质粒 |
| P3864/pCMV-SPORT6-SLU7人源基因质粒 |
| P3865/pCMV-SPORT6-AHCYL1人源基因质粒 |
| P3866/pCMV-SPORT6-C15orf39(1同义突变）人源基因质粒 |
| P4882/pCMV-SPORT6-ACAA1（点突变）人源基因质粒 |
| P3867/pCMV-SPORT6-CBS（1同义突变）人源基因质粒 |
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文献和实验【专题讨论】原核表达秘笈之宿主菌株的选择！（接原原核表达研究者关心的10个问题贴）
表达真核基因的时候，真核基因中的一些密码子对于原核细胞来说可能是稀有密码子，从而导致表达效率和表达水平很低。改造基因是比较麻烦的做法，Rosetta 2系列就是更好的选择——这种携带pRARE2质粒的BL21衍生菌，补充大肠杆菌缺乏的七种（AUA, AGG, AGA, CUA, CCC, GGA 及CGG）稀有密码子对应的 tRNA，提高外源基因、尤其是真核基因在原核系统中的表达水平。（已经携带有氯霉素抗性质粒）。 当要表达的蛋白质需要形成二硫键以形成正确的折叠时，可以选择K–12衍生菌
载体主要有病毒和非病毒两大类，其中质粒DNA是一种新的非病毒转基因载体。 一、一个合格质粒的组成要素 复制起始位点Ori，即控制复制起始的位点。原核生物DNA分子中只有一个复制起始点。而真核生物DNA分子有多个复制起始位点。 抗生素抗性基因：可以便于加以检测，如Amp+ ，Kan+ 多l克隆位点：MCS克隆携带外源基因片段 P/E：启动子/增强子
成分与包装成分互补，含有包装、逆转录和整合所需的 HIV 21顺式作用序列。同时具有异源启动子控制下的多克隆位点及在此位点插入的目的基因。为降低两种成分同源重组产生有复制能力的病毒 （RCV）的可能性，将包装成分的 5′ LTR 换成巨细胞病毒（CMV）立即早期启动子，3′ LTR 换成 SV 40 polyA 位点等。将包装成分分别构建在两个质粒上，即一个表达 gag 和 pol、另一个表达 env。根据这个原理，Naldini 和 Kafri 等构建了三质粒表达系统。
