pCMV-SPORT6-KRAS（1点突变）人源基因质粒

11个注意事项帮你搞定细胞转染

），绿色荧光蛋白（GFP），荧光素酶（Lux或Luc）以及b-半乳糖苷酶（b-gal）。可以使用简单的非同位素方法检测b-gal的表达以测定转染效率和活性。pCMV SPORT- bgal质粒包含CMV启动子调控下的LacZ基因，转染入真核细胞内后可以直接表达bgal。结合简单的检测步骤，可以做为监测转染条件的一种方便灵敏的方法。 09稳定转染细胞系的筛选 用载体中所含的选择标志进行筛选是建立稳定转染细胞系最常用的方法。抗生素抗性基因可以与目的基因在同一个质粒上，也可以在不同的质粒上。如果两个不同

基因组编辑技术应用于作物遗传改良的进展（上篇）

-crRNA 和加长 pre-crRNA 融合构建了 crRNA-Cpf1 系统，在水稻中的编辑效率最高可达 41.2%;HU 等也将 LpCpf1 和 crRNA 整合开发了 CRISPR-Cpf1 系统，并利用该系统成功实现水稻内源基因的定点编辑;KIM 等开发了 Cpf1–RNP(ribonucleoprotein) 系统，并成功利用该系统对大豆和烟草的内源基因进行定点突变。此外，BEGEMANN 等将 Cpf1、crRNA 和供体片段构成融合表达载体，对水稻叶绿素 a 加氧酶基因 OsCAO

一文读懂 CRISPR 编辑技术

的上下游两端的序列连接起来，从而实现了目的基因的敲除。再如，可为细胞提供一个修复的模板质粒，这样细胞就可按照提供的模板在修复过程中引入片段插入或定点突变。也可对受精卵细胞进行基因编辑，并将其导入代孕母体中，可实现基因编辑动物模型的构建。