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- 中国
- YS2084C
- 2025年07月09日
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- 详细信息
- 文献和实验
- 技术资料
- 库存：
20
- 细胞类型：
I类
- 品系：
优良品
- 组织来源：
ATCC来源
- 物种来源：
ATCC来源
- 细胞形态：
贴壁
- 器官来源：
ATCC来源
- 运输方式：
常温运输或冻存干冰运输
- 年限：
3~5代
- 生长状态：
优良
- 规格：
5×106cells/T25细胞培养瓶
产品规格：5×10^6cells/T25细胞培养瓶
生长条件：
| 培养条件 | 具体培养基条件请咨询我们 |
| 温度 | 37℃ |
| 空气条件 | 5% CO2，95% AIR |
| 传代方法 | 1:2传代，2~3天换液 |
| 冻存条件 | 90%FBS+10%DMSO |
人正常乳腺上皮细胞MCF10A，使用方法
1、您收到细胞后，请按照以下方法进行操作：
取出25cm2培养瓶，75%酒精擦拭培养瓶，拆下封口膜，放入37℃，5%CO2细胞培养箱中静置3-4小时以稳定细胞状态，然后换用新鲜完全培养液继续培养或进行传代。
2、细胞传代：
1）细胞生长至覆盖培养瓶的80%面积时，弃25cm2培养瓶中的培养液，用PBS清洗细胞一次；
2）添加0.25%胰蛋白酶消化液约1ml至培养瓶中，倒置显微镜下观察，待细胞回缩变圆后加入完全培养液终止消化，再轻轻吹打细胞使之脱落，然后将悬液转移至15ml离心管中，1000rpm离心5min；
3）弃上清，沉淀细胞用12ml完全培养基重悬，然后按1:2比例进行分瓶传代，最后放入37℃，5%CO2细胞培养箱中培养；
4）待细胞完全贴壁后，观察培养结果，之后进行换液培养或传代。
3、细胞冻存：
1）细胞生长至覆盖培养瓶的80%面积时，弃25cm2培养瓶中的培养液，用PBS清洗细胞一次；
2）添加0.25%胰蛋白酶消化液约1ml至培养瓶中，倒置显微镜下观察，待细胞回缩变圆后加入完全培养液终止消化，轻轻吹打细胞使之脱落，然后将悬液转移至15ml离心管中，1000rpm离心5min；
3）用适量的冻存液（FBS：DMSO=9 ：1）重悬细胞，并放置于冻存管中；
4）先将细胞冻存管放置于-20℃ 1.5h，然后将其移入-80℃过夜，24h后转入液氮中进行长期保存。使用程序降温盒可直接放入-80℃。
4、细胞复苏：
1）从液氮中取出细胞冻存管（注意：佩戴防爆管面具），快速将其置入37℃水浴中解冻，直至冻存管中无结晶，然后用75%的酒精擦拭冻存管外壁；
2）将冻存管中的细胞移至含5ml完全培养基的15ml离心管中， 1000rpm离心5min；
3）弃上清，沉淀用5ml完全培养基重悬，接种25cm2培养瓶，于37℃，5%CO2细胞培养箱中培养；
4）第二天，换用新鲜完全培养基继续培养。
人正常乳腺上皮细胞MCF10A，细胞传代：收到细胞后，请对细胞培养瓶外表进行消毒，将细胞置于培养箱中进行 1-2 小时的缓冲，待细胞恢复基本生长状态后，进行后续细胞实验。在倒置显微镜下观察整个细胞生长情况：
（一）细胞未长至 85%时，用 75%酒精喷洒整个瓶消毒后放到生物操作台内，严格无菌操作，打开细胞培养瓶，若培养瓶上无特殊标注，吸去剩余培养液，只留 6-8ml 培养液继续培养。
（二）细胞已长满（达 85-95%）。即可进行传代，具体步骤如下：
1.弃去培养液，用 PBS 洗涤 1-2 次，
2.加入 1.0ml 胰酶消化液，37℃消化，显微镜下观察细胞消化情况，若细胞回缩变圆、透亮、轻拍甁壁呈流沙样脱落，则迅速拿回操作台，加入双倍的含 10%血清的完全培养液，终止消化并轻轻吹打细胞，使其变成单细胞悬液，
3.将细胞收集于离心管中离心 1000rmp/5min，弃上清，轻弹管底，将细胞弹散，
4.加入新鲜培养液重悬细胞，进行传代、冻存，
5.如果没有特别说明，建议收到细胞后的第一次传代比例为 1:2。
人正常乳腺上皮细胞MCF10A，常见问题及解决方法：
1、观察细胞密度最好用（4X物镜）低倍镜观察，以便正确的判断细胞密度；观察细胞形态请用（10X 或 20X）高倍镜观察；
2、瓶中运输的培养液不能重复使用，请换新鲜培养液培养；
3、有些细胞贴壁不牢，如发现贴壁细胞有脱落，可离心重悬后接种到新瓶内；
4、收到细胞后，若发现培养瓶破损、漏液及细胞污染，请及时与我们联系。
5、培养瓶有破裂，培养液有漏液：细胞极大可能会污染，所以我们会及时安排帮老师解决。
6、细胞漂浮：培养瓶不开封，瓶口酒精擦拭后平躺放置在培养箱。1-2 小时后观察，
7、如细胞大部分又贴回瓶底，表明细胞活力正常，剩余漂浮的细胞可以去掉，留 8-10ml 培养液培养观察，细胞生长至汇合度 85-95%，进行消化传代；如细胞还是不贴壁， 将细胞离心收集转到新培养瓶，原培养瓶加部分培养液继续培养，中间注意观察，我 们的技术人员会一直跟踪指导，直到问题解决。
8、细胞消化铺板，细胞死亡较多。 第一消化时间掌控好切勿消化过度，第二终止要完全（以T25瓶为例，加1ml胰酶用5ml完全培养基终止），第三控制吹打次数和力度，避免损伤。
我公司代理销售ATCC来源，sciencell来源，上海细胞库来源等细胞销售，另我公司有自建细胞库，生产培养各类细胞系，采用灌注法制备各种原代细胞。
欢迎新老客户咨询订购：人正常乳腺上皮细胞MCF10A
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文献和实验MCF―10A、HBLl00、MCF―7和MDA―MB―231中，14―3―3σ基因CpG岛是非甲基化的，而在Hs578t和MDA―MB―435中却是完全甲基化的。体外实验表明，用5―氮杂―2―脱氧胞苷处理14―3―3。基因失活的细胞可恢复其表达，这更进一步说明14―3―3σ基因表达沉默与其CpG岛甲基化密切相关。此外，6个正常乳腺上皮活检标本都未发生甲基化，而32例乳腺癌的活检标本14―3―3σ基因都发生甲基化。这些研究结果表明，乳腺癌中14―3―3σ基因的表达缺失与甲基化密切相关。
Nature 深度剖析：管坤良与 Alj 组研究成果为何截然相反，Hippo 通路调控乳腺癌的两面性
1/2，可能会造成不同实验结果。作者猜测，敲除 LATS1/2 带来的 YAP/TAZ 异常持续活化可能对细胞状态有较大的改变，从而使细胞启动某些不为人知的代偿通路以维持稳态，从而改变了 Hippo 通路对 ERα 的调控模式。此外，在 LATS1/2 过表达实验中，Alj 组使用的是瞬间转染，而管组使用的是稳定转染，作者认为这或许会带来一定差异。 2. 其次，双方使用的细胞培养条件有部分不同。Bentires-Alj 组使用的是 M5 培养基培养 PHBECs 和 MCF10A 细胞，鉴于这一培
breast epithelial MCF-10A cells. 科学问题：双酚 S (BPS) 与双酚 A (BPA) 具有相似的雌激素效应。考虑到 BPS 的内分泌干扰效应，本研究采用基于质谱的代谢组学和定量蛋白质组学方法，研究了 BPS 对正常人乳腺上皮细胞株 MCF-10A 的影响。 研究内容 表型实验：暴露于 BPS 达 24 小时后，MCF-10A 细胞的增殖以一种刺激的方式发生改变，在剂量为 1μM 时增殖率最高。 蛋白质组分析：总共有 200 种蛋白质被鉴定为在暴露于 BPS
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