第一链cDNA合成试剂盒(预混试剂)(去除基因组DNA)

特别提示：包括第一链cDNA合成试剂盒(预混试剂)(去除基因组DNA)在内，本公司的所有产品仅可用于科研实验，严禁用于临床医疗及其他非科研用途！

产品名称：第一链cDNA合成试剂盒(预混试剂)(去除基因组DNA)
英文名称：BalbScript PreMix 1st Strand cDNA Synthesis UltraMix
产品货号：JN0005
产品规格：50次|100次

  本试剂盒是以mRNA或者总RNA为模板，高效合成第一链cDNA。本产品含有反转录反应所需的全部试剂（BalbScript Reverse Transcriptase，RNase Inhibitor，Oligo(dT)18，Random N6，dNTPs），浓度为2×。反应时只需要加入RNA模板和水即可，操作简单，降低操作过程中的污染。本制品含有去除基因组的成分gDNA Purge，可以同步去除基因组DNA污染。反应结束后，85℃加热5秒钟，就可以失活反转录酶、RNA酶抑制剂以及gDNA Purge。合成的第一链cDNA能直接用于PCR或荧光定量PCR的模板以及第二链cDNA的合成或线性RNA扩增的模板，也可用于带有放射性或非放射性核苷酸标记第一链cDNA的实验。

试剂盒组成：

组份	JN0005-50次
2×BalbScriptR PreMix 1st Strand cDNA Synthesis UltraMix	500μl
gDNA Purge	50μl
RNase Free Water	1ml

注意事项：
1、用DEPC处理实验用到的所有器材，或者购买已经证明无核酸酶的实验用具，整个实验过程需戴手套并经常更换手套，避免RNA酶的污染。
2、确保所用试剂中无RNA酶污染。
3、试剂盒如不使用，要严格密封保存。在反转录过程中，所有管盖要确保扣严。
4、纯化过的RNA要保证不含有盐，金属离子，乙醇和苯*，因为以上成分会干扰第一链cDNA的合成反应。可采用乙醇沉淀法去除痕量污染物。

实验步骤：

第一链cDNA合成:
1、融化后，将试剂盒中各组分混匀并稍微离心后置于冰上。
2、按顺序加入下面的反应物

模板RNA	总RNA(0.1 ng -5μg) poly(A) mRNA(10 pg) 特异性RNA(0.01 pg)
2×BalbScript PreMix UltraMix	10μl
gDNA Purge	1μl
RNase Free Water	至20μl

3、可选优化步骤。如果RNA模板GC含量高或者含有二级结构，可先将RNA模板和RNase Free Water混匀后，65℃孵育5分钟，冰上冷却后再加入其它组分。
4、轻柔混匀后离心，于42℃条件下孵育60分钟。 如果RNA模板中不含poly A结构，可先在25℃条件下孵育5分钟，随后转到42℃条件下孵育60分钟。
5、70℃加热5min终止反应。
反应产物可直接用于PCR反应，如果不立即使用，在-20℃可保存一周左右。如想延长保存时间，建议使用-70℃保存。

第一链cDNA的PCR扩增:
合成的第一链cDNA可直接用于PCR或qPCR。第一链cDNA反应液体积不能超过PCR反应体系的1/10。通常50 μl的PCR反应体系中，第一链cDNA反应液加入2μl。

储存条件：-20℃

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