2×RoomTop Taq PCR MasterMix

特别提示：包括2×RoomTop Taq PCR MasterMix在内，本公司的所有产品仅可用于科研实验，严禁用于临床医疗及其他非科研用途！

产品名称：2×RoomTop Taq PCR MasterMix
产品货号：JN0035
产品规格：1ml×5

  本制品是以2×Taq PCR MasterMix为基础，与新型稳定剂整合后研发成功的预混试剂，具有极佳的保存稳定性，室温存放2个月，4℃存放6个月后，依然能保持极佳的扩增性能。2×RoomTop Taq PCR MasterMix保持了2×Taq PCR MasterMix试剂的特点，扩增长度可达8kb，能对4kb及其以下长度的片段进行高效地扩增。使用时只需加入模板和引物并稀释到一倍浓度即可进行PCR反应，大大地简化了操作过程，减少了 PCR操作过程中的污染。2×RoomTop Taq PCR MasterMix提供快速上样型（含高纯度蓝色染料）及不含染料的普通型两种形式供您选择。快速上样型在PCR反应完成后可直接电泳，节省时间。经测试，高纯度染料的加入不影响PCR反应。

产品特点：
1、可置于实验台上的PCR鉴定试剂。
2、室温存放2个月，4℃存放6个月，扩增性能不受影响。
3、可直接用于菌落、菌液等PCR鉴定实验。

产品用途：常规PCR鉴定；小片段DNA克隆；PCR产物加A。

使用建议：
1、使用本试剂扩增得到的PCR产物3′ 端有一突出"A"碱基，可直接克隆于 T载体中。
2、PCR反应液请在冰上配制，然后置于PCR仪上进行。这种冷启动法（Cool Start Method）可增加PCR扩增的特异性，得到良好的PCR结果。
3、使用PCR克隆目的片段时，为减少PCR过程中的随机突变，可适量增加模板量，减少PCR循环（如20至25次循环）。

应用实例：

图例一）在50μl 体系中，使用室温保存不同 时间后2×RoomTop Taq PCR Mix试剂对小鼠基因组1.6kb片段进行扩增
泳道M：DNA Ladder 2000 Plus
泳道1：0周 泳道2：2周
泳道3：4周 泳道4：6周
泳道5：8周 泳道6：10周

常用反应体系(50μl)：

组分	体积
2×PCR MasterMix*	25μl
上游引物	0.2-1.0μM(终浓度)
下游引物	0.2-1.0μM(终浓度)
模板	1-50ng（质粒）
	10ng-1μg(基因组)
ddH2O	至50μl
*Mg2+终浓度为2mM

常用PCR循环：

当扩增片段＜3K：
94℃	10分钟
30次循环	94℃，20秒 57℃ 20秒 72℃根据产物长度调整，60秒/kb
72℃	5分钟
4℃	保温
当扩增片段≥3K（推荐引物长度≥30bp）：
94℃	10分钟
30次循环	94℃，5秒 68℃ 根据产物长度调整，60秒/kb
72℃	5分钟
4℃	保温

PCR MasterMix选购指南：

编号	产品名称	特点
适用于菌落鉴定、菌液鉴定及常规PCR鉴定实验的Mix系列
JN0030	2×Taq PCR MasterMix	高性价比PCR Mix，使用简便，扩增灵敏度高
JN0034	2×Complex Taq PCR MasterMix	JN0030改进版，性能更均衡，适用面更广
JN0040	2×Fast Taq PCR MasterMix	最快速的PCR试剂，常规PCR鉴定45分钟内知道结果
JN0035	2×RoomTop Taq PCR MasterMix	可放在手边的PCR试剂，室温稳定存放60天
JN0036	2×RoomTop Fast Taq PCR MasterMix	室温稳定存放60天，高速PCR试剂，常规PCR鉴定45分钟内知道结果
适用于一些较难扩增的PCR条带的鉴定及短片段克隆
JN0032	2×Taq Plus PCR MasterMix	扩增效率更高及较好的保真度
JN0038	2×Hot Start Taq PCR MasterMix	采用热启动Taq，可获得很好的特异性
JN0041	2×Ultra Taq PCR MasterMix	高速扩增酶，优化配方，解决PCR扩增难题的，灵敏度高
高保真酶试剂，适用于长片段基因克隆
JN0031	2×Pfu PCR MasterMix	采用高保真酶，适用于基因克隆
JN0043	2×Fast Pfu PCR MasterMix	采用改良型高保真酶，更好的扩增效果，4倍扩增速度；扩增迅速
防止PCR产物二次污染、极高检测灵敏度的PCR试剂
JN0047	2×PCR MasterMix(防污染)	采用dUTP/UDG酶系统，从根本上杜绝PCR产物二次污染
JN0033	2×Genotyping PCR Kit（nomal）	极高检测灵敏度，可达到普通PCR试剂102至104倍扩增灵敏度

PCR MasterMix性能对比表：

名称	编号	扩增时间	扩增长度	是否有3"-A	基因组扩增
2×Taq PCR MasterMix	JN0030	1min/kb	≤8kb	√	+
2×RoomTop Taq PCR MasterMix	JN0035	1min/kb	≤8kb	√	++
2×Complex Taq PCR MasterMix	JN0034	1min/kb	≤8kb	√	+
2×Fast Taq PCR MasterMix	JN0040	15s/kb	≤8kb	√	+
2×RoomTop Fast Taq PCR MasterMix	JN0036	15s/kb	≤8kb	√	++
2×Ultra Taq PCR MasterMix	JN0041	15s/kb	≤8kb	√	+++
2×Taq Plus PCR MasterMix	JN0032	1min/kb	≤20kb	√	++++
2×Ultra Taq Plus PCR MasterMix	JN0042	15s/kb	≤30kb	√	++++
2×Hot Start Taq PCR MasterMix	JN0038	1min/kb	≤8kb	√	++++
2×Hot Start Taq Plus PCR MasterMix	JN0039	1min/kb	≤20kb	√	++++
2×Pfu PCR MasterMix	JN0031	1min/kb	≤6kb	×	+
2×Fast Pfu PCR MasterMix	JN0043	30min/kb	≤12kb	×	+
2×SYBR Green Realtime PCR MasterMix	JN0049	1min/kb	≤8kb	√	++
2×Genotyping PCR Kit（Normal）	JN0033	1min/kb	≤8kb	√	+++++
2×Genotyping PCR Kit（Fast）	JN0044	15s/kb	≤8kb	√	+++++
2×PCR MasterMix(防污染)	JN0047	1min/kb	≤8kb	√	+

除了2×RoomTop Taq PCR MasterMix,，我公司还供应以下相关产品：



名称：PCR级海藻糖溶液
货号：BTN130506
规格：1.5mL
本产品为浓度为5M的海藻糖的水溶液，可以直接添加到PCR反应体系或逆转录反应中提高酶的热稳定性和活性。

产品特点：
1.在反应体系中加入海藻糖，可以增加热敏感的酶在高温下的稳定性和活性。
2. 海藻糖能增加鼠白血病病毒逆转录酶(Reverse Transcripatase)的热稳定和热激活特性，使其在60℃仍具有全部活性，足以在mRNA二级结构诱导终止反应之前合成全长的cDNA，反应效率大大提高。
3. 有助于提高干燥保存的酶的活性。

储存条件：低温运输，4℃保存，保存期一年

使用方法：按照1/3体积，将本产品加入到PCR体系中即可。

名称：2×Taq MasterMix(含染料)
货号：WE0102
规格：1ml|5ml|25ml
  Taq MasterMix是由Taq DNA Polymerase、PCR Buffer、Mg2+、dNTPs以及PCR稳定剂和增强剂组成的预混体系，浓度为2×。预配好的PCR混合液可根据使用量的多少调节扩增产物的特异性和得率，使操作更加简单快捷，并可最大限度地减少人为误差和污染。*创的MasterMix配方使扩增产物得率高，重复性强，稳定性好。本产品已加入染料(蓝色)，反应结束后可直接进行电泳检测，无需再使用上样缓冲液。扩增得到的PCR产物3"端附有一个“A”碱基，因此可直接用于T/A克隆。主要适用于PCR法扩增DNA、DNA序列测定等实验。

产品组成：

组份	1ml	5ml	25ml
2×Taq MasterMix(With Dye)	1ml	5×1ml	5×5ml
ddH2O	1ml	5×1ml	5×5ml

注意：2×Taq MasterMix含有Taq DNA Polymerase, 3 mM MgCl2 和400μM each dNTP。

质量控制：
1、经检验无外源核酸酶活性；
2、PCR方法检测无宿主残余DNA；
3、能有效地扩增多种基因组中的单拷贝基因。

使用方法：
以下举例为以人基因组DNA为模板，扩增1 kb的片段的PCR反应体系和反应条件，实际操作中应根据模板、引物结构和目的片段大小不同进行相应的改进和优化。

1、PCR反应体系：
 

试剂	50μl反应体系	终浓度
2×Taq MasterMix(With Dye)	25μl	1×
Forward Primer，10μM	2μl	0.4μM
Reverse Primer，10μM	2μl	0.4μM
Template DNA	<0.5μg	<0.5μg/50μl
ddH2O	up to 50μl

注意：引物浓度请以终浓度0.1-1.0μM作为设定范围的参考。扩增效率不高的情况下，可提高引物的浓度；发生非特异性反应时，可降低引物浓度，由此优化反应体系。

2、PCR反应条件：
 

步骤	温度	时间	循环数
预变性	94℃	2 min
变性	94℃	30 s	25-35 个循环
退火	55-65℃	30 s
延伸	72℃	30 s
终延伸	72℃	2 min

注意：
1)一般实验中退火温度比扩增引物的熔解温度Tm低5℃，无法得到理想的扩增效率时，适当降低退火温度；发生非特异性反应时，提高退火温度，由此优化反应条件。
2)延伸时间应根据所扩增片段大小设定，本产品Taq DNA Polymerase的扩增效率为2 kb/min。
3)可根据扩增产物的下游应用设定循环数。如果循环次数太少，扩增量不足；如果循环次数太多，错配机率会增加，非特异性背景严重。所以在保证产物得率的前提下应尽量减少循环次数。


储存条件：-20℃，避免反复冻融。