Ca2+钙离子染色试剂盒(Fluo-3,AM法)

特别提示：包括Ca2+钙离子染色试剂盒(Fluo-3,AM法)在内，本公司的所有产品仅可用于科研实验，严禁用于临床医疗及其他非科研用途！

产品名称：Ca2+钙离子染色试剂盒(Fluo-3,AM法)
产品货号：HR0612
产品规格：50T|100T

钙离子检测试剂盒采用Fluo-3,AM 细胞内钙离子浓度的荧光探针检测钙离子。
Fluo-3,AM穿透细胞膜进入细胞后被细胞内的酯酶剪切形成Fluo-3，从而被滞留在细胞内。
Fluo-3 游离配体几乎是非荧光性的，其荧光不会随钙离子浓度升高而增强。但是，当它与细胞内钙离子结合后可以产生较强的荧光，荧光会增加60 至100 倍，最大激发波长为506nm，最大发射波长为 526nm。实际检测时推荐使用的激发波长为488nm 左右，发射波长为 525～530nm。可以使用荧光显微镜、酶标仪、激光共聚焦显微镜或流式细胞仪检测细胞内钙离子浓度的变化。

储存条件：-20℃避光保存。
有效期：一年。

注意事项：
●本试剂盒仅供科学研究使用，不可用于诊断或治疗。
● 螺旋盖微量试剂管装的试剂在开盖前请短暂离心，将盖和管内壁上的液体离心至管底，避免开盖时试剂损失。
● 样品或试剂被细菌或真菌污染或试剂交叉污染可能会导致错误的结果。
● 最好使用一次性吸头、管、瓶或玻璃器皿，可重复使用的玻璃器皿必须在使用前清洗并彻底清除残留清洁剂。
● 避免皮肤或粘膜与试剂接触。
● 钙离子染色液为DMSO 溶液，冬季气温较低时在室温时为凝固状态，极易粘附在管壁、吸头壁。注意需要加热溶解，吸头也需要放在培养箱预热，否者容易再次凝固在吸头内壁产生损耗。
●荧光染料均存在淬灭问题，请尽量注意避光，以减缓荧光淬灭。

试剂盒以外自备试剂和仪器：
● Hanks balanced salt solution(HBSS)或HEPES或PBS ● 移液器及吸头 ●荧光显微镜

使用方法：

使用注意事项：
● 螺旋盖微量试剂管装的试剂在开盖前请短暂离心，将盖内壁上的液体收集至管底，避免开盖时液体洒落。
● 细胞处理需要小心操作,尽量避免人为的损伤细胞。
●染色后立即进行分析。
●标记的条件因细胞种类而异，根据不同样本的实际染色结果做相应调整，在每次实验前，请先确定最佳条件。以下方法仅供参考。
● 可以在染色溶液中加入等体积的20% Pluronic F127溶液，Pluronic F127可以帮助Fluo-3,AM更快进入细胞，不建议在Pluronic F127中长期保存Fluo-3,AM溶液。

1．染色工作液的配制：
用 HBSS 稀释 Fluo-3,AM溶液400倍-4000倍，配制成Fluo-3,AM染色工作液。
【注】：推荐该探针加载浓度在400-4000倍稀释，具体的使用浓度需根据实验要求进行优化。为了避免过度加载造成细胞毒性，建议在取得有效结果的基础上尽量使用最低探针浓度。
2．将 Fluo-3,AM工作液加入细胞，在37℃孵育20分钟。
3．加入5倍体积的含有1%胎牛血清的HBSS，再继续孵育40分钟。
4．用PBS或HBSS洗涤细胞2-3次。用HBSS重悬细胞
5．37℃下孵育10分钟，然后用该细胞进行荧光钙离子检测。激发波长488-506nm，发射波长526nm。

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