pEGFP-N2 荧光表达载体

特别提示：包括pEGFP-N2 荧光表达载体在内，本公司的所有产品仅可用于科研实验，严禁用于临床医疗及其他非科研用途！

产品名称：pEGFP-N2 荧光表达载体
产品货号：QN1061
产品规格：20μl

pEGFP-N2 encodes a red-shifted variant of wild-type GFP (1–3) which has been optimized for brighter fluorescence and higher expression in mammalian cells. (Excitation maximum = 488 nm;emission maximum = 507 nm.) pEGFP-N2 encodes the GFPmut1 variant which contains the double-amino-acid substitution of Phe-64 to Leu and Ser-65 to Thr

载体信息：
启动子：CMV
复制子：pUCori,f1ori
终止子：SV40poly(A)
载体别名：pEGFPN2, pEGFP N2
载体分类：哺乳细胞表达载体，荧光蛋白报告载体
载体大小：4737bp
载体标签：C-EGFP
原核抗性：卡那霉素(Kanamycin)
筛选标记：新霉素(Neomycin)
克隆菌株：DH5α
表达宿主：哺乳细胞
培养条件：37℃，LB培养基
5" 测序引物：CMV-F：5"-CGCAAATGGGCGGTAGGCGTG-3"
3" 测序引物：EGFP-N：5"-CGTCGCCGTCCAGCTCGACCAG-3"

储存条件：-20℃

除了pEGFP-N2 荧光表达载体,pEGFPN2, pEGFP N2，我公司还供应以下相关产品：



名称：DNA粘转平试剂盒
货号：BTN60107
规格：20次
本产品利用Pfu DNA polymerase所具有3′到5′的聚合酶活性和5′到3′外切酶活性，将3′或5′突出的DNA片段转化成平末端，用于克隆工作。

产品特点：
1. 简单，精心优化过的2×Polishing Buffer中含有所需要的所有成分，不需要单独准备。
2.适用于任何平末端的DNA载体。

产品组成：

成分	规格
Pfu DNA Polymerase(3U/μL)	20μl
2×Polishing Buffer	0.5ml
说明书	1份

储存条件：低温运输，-20℃保存，保存期限为一年。

使用方法：

1. DNA片段的准备：
无论是来源Taq，Tth,T7，Klenow和Vent等DNA聚合酶合成的DNA片段，还是用限制性内切酶制备的DNA片段，粘转平之前均需要将DNA沉淀以便去除反应液中的无关成份。沉淀DNA的方法包括经典的盐/纯沉淀法，离心柱DNA 吸附法和百奥莱博的一管式非醇超快DNA沉淀法。
2. 设置粘转平(Polishing)反应：

在一个干净的离心管中，分别加入
3′或5′突出的DNA片段	10-500ng
2×Polishing Buffer	25μL
Pfu DNA polymerase	1μL
补水到	50μL
72℃保温2小时。

注意：如果不使用热盖式PCR 仪器加热，则需要在反应管中再加入适量液体石蜡以防反应过程中水份蒸发。
3.反应后处理
粘转平反应后，样品可以放-20℃长期保存，也可以直接用于T4 DNA连接酶催化的连接反应。对10μL的连接反应体系，一般需要加入1-2μL粘转平反应液。由于Pfu DNA polymerase在连接反应的温度条件下几乎没有活性，所以不必去除。但文献报道，去除后连接效率更高。