UDG酶

特别提示：包括UDG酶在内，本公司的所有产品仅可用于科研实验，严禁用于临床医疗及其他非科研用途！

产品名称：UDG酶
产品货号：JN0059
产品规格：200U

  UDG酶分子量25KDa，能特异性识别DNA单链或双链中的尿嘧啶残基，并从DNA上水解去除尿嘧啶残基，防止DNA发生突变，是碱基切除 修复过程中的重要组分，对RNA无活性。

产品用途：
UDG酶常被用于消除PCR扩增中的残余污染。在PCR反应液配制时，将dUTP和dTTP 按一定的比例混用，使得扩增产物都含有脱氧尿嘧啶。在进行PCR扩增前，在PCR混合液添加UDG酶，并增加2分钟37℃～50℃的保温步骤即可消除以往PCR产物的残留污染，由于UDG在PCR循环中的94℃dU的PCR产物。

使用建议：
UDG酶在Taq酶反应缓冲液中同样具有活性。在PCR反应液中直接添加UDG酶即可，推荐用量为0.2U每50μl体系，在PCR循环程序前增加2分钟37℃ ～50℃保温及可完全消除多达1ng含UTP模板的污染。

应用示例：
UDG酶特异性降解含UTP的DNA模板

反应体系：

加入物	加入量
2×Taq MasterMix	25μl
500bp模板（含UTP）	1ng
500bp扩增引物对	终浓度0.2μM
250bp模板（无UTP掺入）	1ng
250bp扩增引物对2	终浓度0.2μM
dH2O	至50μl

对照组未添加UDG酶,实验组每50μl反应体系中添加0.2U UDG酶。

PCR循环程序：

50℃	2分钟(降解含UTP的 污染模板)
94℃	4分钟(灭活UDG酶)
30次循环	94℃,30秒 57℃,30秒 72℃,30秒
72℃	5分钟
4℃	保温

图例1） 结果显示：UDG酶能特异性降解含UTP的DNA模板并阻止其 PCR扩增，且不影响正常模板的PCR 扩增反应。
泳道M：DL2000 泳道1，2：对照组，未添加UDG酶
泳道3，4：实验组，0.2U UDG酶处理

活性定义：60分钟内催化1nmol尿嘧啶从含尿嘧啶双链DNA上释放所需要的酶量定义为一个单位。

常用PCR残余污染消除体系：

加入物	加入量
5×Taq Buffer with Mg2+	10μl
上游引物	0.2-1.0μM (终浓度)
下游引物	0.2-1.0μM (终浓度)
dATP, dGTP, dCTP	各0.2mM(终浓度)
dTTP	0.1mM(终浓度)
dUTP	0.2mM(终浓度)
如全部使用dUTP替代dTTP	0.4mM(终浓度)
模板	1-50ng（质粒）
	10ng-1μg(基因组)
Taq	0.25μl（1.25U ）
ddH2O	至50μl
UDG酶	0.2U，如残余污染严重可适量增加酶用量

除了UDG酶,，我公司还供应以下相关产品：



名称：PCR级高GC的DNA清除剂
货号：BTN61203
规格：1.5mL
本产品是我司开发的专门用于富含GC的DNA模板扩增的试剂。

产品特点：
1.高效，使用效果普遍好于常规的添加DMSO和甜菜碱的方法。
2.可以处理GC含量高达80%的DNA模板。
3. 操作简单，将本产品用于溶解DNA沉淀即可使用。

储存条件：常温运输及保存，有效期一年。

使用方法：
将乙醇沉淀的高GC DNA直接溶解在适量的本产品中，充分吹打均匀，然后直接将DNA加入PCR反应体系中进行PCR反应。加入的DNA溶液最好不要超过PCR终体积的1/10。剩余的DNA可以长期保存。

名称：dCTP溶液(100mM)
货号：YT386
规格：250μl
dCTP即2"-deoxycytidine 5"-triphosphate，中文名为脱氧胞苷三磷酸，常用于PCR、real-time PCR、RT-PCR、cDNA或普通DNA合成、引物延伸反应、DNA测序、DNA标记等各种常规分子生物学反应。

分子式：C9H13N3O13P3Na3
分子量：533.1(酸形式的分子量为467.1)
dCTP的最大吸收波长：271nm。

本dCTP溶液用超纯水配制，并用高纯度NaOH溶液调节pH值至7.0，浓度为100mM，即100mmol/L。
本dCTP溶液不含DNase、RNase、phosphatase和蛋白酶。
本dCTP溶液经测试，可以直接用于PCR等各种常规分子生物学反应。

储存条件：-20℃。

名称：快速实时荧光定量PCR的预混体系(荧光探针)(低含量ROX校正染料)
货号：WE0152
规格：5ml
  本品是专用于探针法(TaqMan，Molecular Beacon等)实时荧光定量PCR的预混体系，浓度为2×,包含Fast Taq DNA Polymerase、PCR Buffer、dNTPs、Mg2+等，操作简单方便。主要用于基因组DNA靶序列和RNA反转录后的cDNA靶序列检测。本品含有的Fast Taq DNA Polymerase，能有效减少在常温条件下由引物和模板非特异性结合或引物二聚体而产生的非特异性扩增，酶的激活仅需在95℃孵育30s。整个PCR反应过程比普通反应可节省约40分钟，大大缩短了PCR的反应时间。独特的PCR缓冲体系与快速热启动酶的组合，有效抑制了非特异产物的产生，并显著提高了PCR的扩增效率，荧光信号更强，灵敏度更高，线性范围更宽。该产品适用范围广，可用于普通和快速定量PCR程序。

  ROX染料用于校正定量PCR仪孔与孔之间产生的荧光信号误差，一般用于ABI、Stratagene等公司的Real Time PCR 扩增仪。不同仪器的激发光学系统有所不同，因此ROX染料的浓度必须与相应的荧光定量PCR仪相匹配。
不需要ROX校正的仪器(WE0151)：
Roche LightCycler 480，Roche LightCyler 96，Bio-rad iCyler iQ，iQ5，CFX96等。
需要Low ROX校正的仪器(WE0152)：
ABI Prism7500/7500 Fast，QuantStudio® 3 System，QuantStudio® 5 System，QuantStudio® 6 Flex System，QuantStudio® 7 Flex System，ViiA 7 system，Stratagene Mx3000/Mx3005P，Corbett Rotor Gene 3000等。
需要High ROX校正的仪器(WE0153)：
ABI Prism7000/7300/7700/7900，Eppendorf，ABI Step One/Step One Plus等。

试剂盒组成：

组份	WE0151-5ml	WE0152-5ml	WE0153-5ml
2×Fast TaqMan Mixture	5×1ml	5×1ml	5×1ml
50×Low ROX	-	200μl	-
50×High ROX	-	-	200μl
ddH2O	5×1ml	5×1ml	5×1ml

注意事项：
1、使用前请上下颠倒轻轻混匀，尽量避免起泡，并经短暂离心后使用。
2、避免反复冻融本品，反复冻融可能使产品性能下降。本产品长期保存可置于-20℃，避光。如果在短期内需要频繁使用，可在2～8℃保存。

使用方法：
以下举例为常规PCR反应体系和反应条件，实际操作中应根据模板、引物结构和目的片段大小不同进行相应的改进和优化。

1、PCR反应体系

试剂	50μl反应体系	终浓度
2×Fast TaqMan Mixture(With ROX)	25μl	1×
Forward Primer，10μM	1μl	0.2μM
Reverse Primer，10μM	1μl	0.2μM
Probe，10μM	1μl	0.2μM
Template DNA	2μl
50×Low ROX or High ROX(可选)	1μl	1×
ddH2O	up to 50μl

注意：
1)通常引物浓度以0.2μM可以得到较好结果，可以在0.1-1.0μM作为设定范围的参考。
2)所用探针的终浓度，与使用的荧光定量PCR仪、探针种类、荧光标记物质种类有关，实际使用时请参照仪器说明书，或各荧光探针的具体使用要求进行浓度的调节。
3)通常DNA模板的量以10-100ng基因组DNA或1-10ng cDNA为参照，因不同物种的模板中含有的目的基因拷贝数不同，可对模板进行梯度稀释，以确定最佳的模板使用量。
4)不同仪器的激发光学系统有所不同，根据使用荧光定量的仪器选择加入50× Low ROX or 50×High ROX。

2、PCR反应程序：
建议采用两步法PCR反应程序，本程序是以ABI 7500荧光定量PCR仪为参照设定。
 

步骤	温度	时间	循环数
预变性	95℃	30 s
变性	95℃	5 s	35-40 个循环
退火/延伸	60℃	30 s

注意：
1)本产品所采用的酶须在预变性95℃、30s条件下实现酶的活化。在此条件下，大多数模板可良好的进行解链。对GC含量高、二级结构复杂的模板，可将预变性时间延长至1-4分钟，以使起始模板充分解链。
2)建议采用两步法PCR反应程序，若因使用Tm值较低的引物等原因，得不到良好的实验结果时，可尝试进行三步法PCR扩增，退火温度请以 56℃-64℃的范围作为设定参考。

储存条件：-20℃，避免反复冻融