SDS-PAGE预混胶（红色浓缩胶系列，15%分离胶）

干货：小分子量蛋白（11KD）WB实验艰辛历程及经验总结

泳吧。4、在我用SDS-PAGE胶进行电泳过程中，一直以来都是按照说明书配制压缩胶和分离胶的，并且在说明书中，以配置2块胶为例，分离胶说明书中是让配置10ml，压缩胶是3ml。我一直以为是对应关系，在这次大悟之后我发现分离和压缩完全不是一对一对应关系，人家只是给了你配置这么多体积胶的配方而已，虽然在一个纵列上，但是绝不是对应关系（我确实才觉悟，高手轻鄙视哈）。5、接上一条经验，所以我在配胶过程中，下层分离胶配制了10ml，但是实际上每块玻板里面只加了大概3.5ml吧，也就是整个玻板高度的60-70%的样子。然后压缩

垂直电泳槽的使用

，以确保胶条插入位置准确。合拢灌胶模具后并直立放置，双手均匀用力向下扣住翼型扳手以关闭灌胶模具。若位置正确，校准卡应该可以正常上下抽拉活动而不被夹在胶条与玻璃板之间。（图3- 5） •用5 ml分离胶溶液（图 6）制备浓度为12％的SDS-PAGE凝胶，然后用移液管将1 ml乙醇滴入装好的灌胶模具中。等候60分钟使凝胶聚合。当把溶液倒入玻璃板夹层之间时，将移液管嘴直接置于玻璃板之间，缓慢地滴出液体，尽量避免形成气泡。凝胶完成聚合后，移除乙醇，将制备好的浓缩胶溶液倒入到分离胶上。轻轻将0.75 mm

Western 实验步骤

℃。 实验步骤 凝胶配制 1） 根据目的蛋白分子量按比例配制分离胶，缓慢摇动混匀，避免由于剧烈混匀混入氧气。待凝胶溶液混合均匀后，将混匀的凝胶溶液缓慢注入两层玻璃板中，再在液面上小心注入一层无水乙醇，以阻止氧气接触凝胶溶液影响凝胶的聚合，保持水平，在 37 ℃ 恒温箱中静置约 1 小时，直至凝胶溶液完全聚合凝固。 2） 按比例配制浓缩胶，缓慢摇动混匀，倒掉分离胶上层无水乙醇并用滤纸吸去已凝固分离胶上的无水乙醇，平缓注入浓缩胶溶液，小心插入梳子，避免齿尖产生气泡。在 37 ℃ 恒温箱中