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- 文献和实验
- 技术资料
- 保存条件:
低温
- 供应商:
臻诺生物
- 规格:
50 块胶
凯基 KGP113‑blue 10% SDS‑PAGE 预混胶(蓝色浓缩胶系列,10% 分离胶)
货号:KGP113‑blue,科研专用,不可临床诊断液态预制预混胶套装,蓝色浓缩胶配方;分离胶浓度 10%,用户只需加入 APS/TEMED 即可灌胶聚合;浓缩胶层呈淡蓝色,方便肉眼区分浓缩胶‑分离胶分界线,减少配胶失误,适合需要自主制胶、大批量制胶的实验室。
核心特性
- 10% 分离胶预混液 + 蓝色 4% 浓缩胶预混液双组分;浓缩胶添加惰性蓝色指示剂,聚合后浓缩胶呈淡蓝色,分离胶透明,胶层边界清晰可见,上样位置直观。
- 分离蛋白范围约14‑205 kDa,适配绝大多数常规中大分子蛋白;不含 APS、TEMED,只需临用前现加即可灌胶,省去称量、配制母液的繁琐步骤。
- 兼容考马斯亮蓝染色、银染、Western blot 转膜;电泳过程蓝色指示剂不干扰蛋白分离、不干扰后续染色与转膜。
⚠️有毒,全程佩戴手套;APS 现配现用;预混胶请勿冷冻。
规格参数
- 分离胶浓度:10%;浓缩胶:4%(蓝色显色)
- 蛋白分离范围:14 kDa‑205 kDa
- 套装组分:10% 分离胶预混液、蓝色浓缩胶预混液(不含 APS、TEMED)
- 包装:可制备20 块微型胶用量
- 储存条件:2‑8℃冷藏,禁止冷冻;有效期 6 个月
- 发货:冰袋发货
简要操作流程
- 临用前取出预混液回温至室温;按比例加入 APS 与 TEMED,轻柔混匀,避免大量气泡。
- 先灌注 10% 分离胶,加水 / 水饱和正丁醇封层,静置聚合。
- 分离胶聚合后弃封层液体,灌入加好 APS/TEMED 的蓝色浓缩胶预混液,插入梳子,等待聚合。
- 拔梳、组装电泳槽,上样,常规 SDS‑PAGE 电泳;蓝色仅存于浓缩胶层,不迁移入分离胶。
- 电泳完成,考染、银染或者转膜 WB
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文献和实验,混匀; ddH2O 3.0 ml 1.0 mol/LTris-HCl pH=8.8 2.1 ml 30% Acr-Bis 2.8 ml 10% SDS 80 ul 10%AP 56 ul TEMED 6 ul 4 向玻璃板间灌制分离胶,立即覆一层重蒸水,大约20min后胶即可聚合; 5 按如下体积配制6%浓缩胶
样品。 跑胶:浓缩胶推荐用 80 伏电压,待样品进入分离胶后,可用 120-180 伏电压。 跑胶完成以后,需先将胶上无样品的多余部分切除,滤纸和海绵需要预先润湿。 分离的蛋白转移至膜载体上 选择合适的膜 转膜:以 NC 膜为例 提前十分钟到半小时用转膜 Buffer 润洗 NC 膜 按照以下的结构来安装转膜体系:负极-海绵-三层滤纸-胶-膜-三层滤纸-海绵-正极。 转膜,一般为 2 小时。 转完后将膜用1×丽春红染液染 5 min(于脱色摇床上摇)。然后用水冲洗掉没染上的染液就可看到膜上的蛋白。将膜
,以确保胶条插入位置准确。合拢灌胶模具后并直立放置,双手均匀用力向下扣住翼型扳手以关闭灌胶模具。若位置正确,校准卡应该可以正常上下抽拉活动而不被夹在胶条与玻璃板之间。(图3- 5) •用5 ml分离胶溶液(图 6)制备浓度为12%的SDS-PAGE凝胶,然后用移液管将1 ml乙醇滴入装好的灌胶模具中。等候60分钟使凝胶聚合。当把溶液倒入玻璃板夹层之间时,将移液管嘴直接置于玻璃板之间,缓慢地滴出液体,尽量避免形成气泡。凝胶完成聚合后,移除乙醇,将制备好的浓缩胶溶液倒入到分离胶上。轻轻将0.75 mm
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