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- 文献和实验
- 技术资料
- 保存条件:
低温
- 供应商:
臻诺生物
- 规格:
50 tests
KGA1017 凯基 KeyGEN Annexin V‑PE/7‑AAD 双染细胞凋亡检测试剂盒
品牌:KeyGEN 凯基生物,货号:KGA1017,流式细胞凋亡检测,科研用,适合多色流式(7‑AAD 光谱窄,串色低于 PI)凯基生物
📦实物包装与组分
- Annexin V‑PE(棕色避光小管)
- 7‑AAD 染色液(棕色避光小管)
- 10× Annexin V Binding Buffer(白色塑料瓶,含 Ca²⁺)
储存:2~8℃避光冷藏,严禁冷冻;染料小管避光保存。适用样本:培养细胞(贴壁 / 悬浮);不推荐直接组织块检测。
📝凯基原厂操作要点(KGA1017 说明书版本)
- 收集细胞:贴壁细胞必须无 EDTA 胰酶,同时收集上清漂浮凋亡细胞;2000 rpm,5 min 离心收集
- PBS 洗涤 2 次,离心收集细胞(1×10⁵~5×10⁵细胞)
- 100 μL 1×Binding Buffer 重悬
- 加 5 μL Annexin V‑PE + 5 μL 7‑AAD,轻柔混匀
- 室温避光孵育 5~15 min
- 补加 400 μL 1×Binding Buffer,1h 内流式上机凯基生物
流式通道
- Annexin V‑PE:488nm 激发,PE 通道(FL2)
- 7‑AAD:488nm 激发,远红通道(FL3/PerCP 通道)
四象限判读和前面一致:
- Q4 活细胞(双阴)
- Q3 早期凋亡(Annexin V‑PE⁺ /7‑AAD⁻)
- Q2 晚期凋亡 / 坏死(双阳)
- Q1 碎片裸核
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文献和实验Annexin V是一种钙离子依赖性磷脂结合蛋白,与磷脂酰丝氨酸PS有高度亲和力,可通过细胞外侧暴露的PS与凋亡早期细胞胞膜结合,将Annexin V标记上荧光染料利用流式细胞仪或荧光显微镜可检测细胞凋亡。 由于凋亡晚期或坏死细胞膜完整性丧失,细胞核染色液可进入细胞内染色细胞核,搭配Annexin V使用可将处于不同凋亡时期的细胞区分开。 A.悬浮细胞: 按照实验方案进行凋亡诱导,300 g离心5 min,弃上清,收集细胞,用PBS洗涤细胞一次,轻轻重悬浮细胞并计数。 取1~5 ×
示例: Jurkat细胞用1μM喜树碱(Camptothecin) (左)或未加药 (右)处理4h,FITC-Annexin V/PI荧光双染细胞凋亡检测试剂盒染色后,流式细胞仪荧光检测。 Annexin V-FITC单阳性细胞为早期凋亡细胞,Annexin V-FITC和PI染色双阳性的细胞为坏死细胞或者晚期凋亡。PI单染色阳性位裸核细胞。 实测数据可能会因细胞类型、细胞凋亡情况,检测仪器等的不同而存在差异,图中数据仅供参考。 流式检测细胞凋亡的数据分析方法: 1) 选中所有颗粒,将FSC
Q:Annexin V 凋亡检测试剂盒的原理是什么? A:Annexin V 是一种钙离子依赖性磷脂结合蛋白,与磷脂酰丝氨酸 PS 有高度亲和力,可通过细胞外侧暴露的 PS 与凋亡早期细胞胞膜结合,将 Annexin V 标记荧光染料如 FITC 利用流式细胞仪或荧光显微镜可检测细胞凋亡。 碘化丙啶(Propidium Iodide, PI)或 7-AAD 可与双链 DNA 特异性结合,并产生强烈的荧光,正常情况下无法透过细胞膜。由于凋亡晚期或坏死细胞膜丧失完整性,核染料 PI 或 7-AAD
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