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文献和实验)后将之放入标明批号的纱布袋中,装于液氮罐的提筒内,先置于液氮罐的颈部,该处约为-70℃,30分钟后,置液氮中(-196℃)冻存。 鼠疟原虫:从感染疟原虫第3~4天的小鼠心脏取血(或摘除眼球取血),注入试管,肝素抗凝,加入等量的10%或15%DMSO及15%或20%小牛血清为保护剂;或加入等体积的甘油、山梨醇保护液(4.2%山梨醇生理盐水180ml加纯甘油70ml),充分混匀。按照上法装管及冻存。也可以在1mm 3 阳性鼠血加0.1mm 3
。 2)上样蛋白量不应超过30ug/mm2 (载荷面积:如果你的胶槽是5mm×1mm,则载荷面为:1mm×5mm=5mm2) 。 3)gel通常在0.5-1h内凝集最好,过快表示TEMED、APS用量过多,此时胶太硬易龟裂,而且电泳时容易烧胶。太慢则说明两种试剂用量不够或者系统实际不纯或失效。 4)混合搅拌速度太快产生气泡影响聚合,导致电泳带畸形。太慢不均匀,特别是甘油。 5)电泳中常出现的一些现象: ︶ 条带呈笑脸状,原因:凝胶不均匀冷却,中间冷却不好。 ︵ 条带呈皱眉状,可能是由于装置不合
【资源】个人整理 Western Blot(步骤简略,但注意事项、经验总结、基本原理很全面)
ug/mm2 (载荷面积:如果你的胶槽是5mm×1mm,则载荷面为:1mm×5mm=5mm2) 。3)gel通常在0.5-1h内凝集最好,过快表示TEMED、APS用量过多,此时胶太硬易龟裂,而且电泳时容易烧胶。太慢则说明两种试剂用量不够或者系统实际不纯或失效。4)混合搅拌速度太快产生气泡影响聚合,导致电泳带畸形。太慢不均匀,特别是甘油。5)电泳中常出现的一些现象:︶ 条带呈笑脸状,原因:凝胶不均匀冷却,中间冷却不好。︵ 条带呈皱眉状,可能是由于装置不合适,特别可能是凝胶和玻璃挡板底部有气泡,或者两边
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