SABC免疫组化试剂盒(兔IgG)(POD显色)

特别提示：包括SABC免疫组化试剂盒(兔IgG)(POD显色)在内，本公司的所有产品仅可用于科研实验，严禁用于临床医疗及其他非科研用途！

产品名称：SABC免疫组化试剂盒(兔IgG)(POD显色)
英文名称：SABC(Rabbit IgG)-POD Kit
产品货号：QN1229
产品规格：100T

本试剂盒适合于一抗为兔IgG的免疫组化实验，DAB显色。

试剂盒组份：
封闭液(5% BSA)——————————10mL
3% H2O2-—————————————10mL
Bio-羊抗兔IgG浓缩液-———————100μL
SABC-POD浓缩液——————————100μL
稀释液——————————————30mL
20×DAB显色液A——————————1mL
20×DAB显色液B——————————1mL

ABC是专为免疫组化和其他免疫检测而设计的，用以显示组织和细胞中抗原分布。链霉亲和素(StreptAvidin)是一种从链霉菌中提取的蛋白质，同亲和素一样对生物素有极高的亲和力，亲和素是一个碱性蛋白质(PI=10)，经改造后可以转变成中性蛋白质。链霉亲和素等电点接近中性，对组织和细胞的非特异吸附很低，基于链霉亲和素的免疫组化方法背景很低。SABC即StreptAvidin-Biotin Complex，SABC大约可形成一百个左右的过氧化物酶和五十个左右的链霉亲和素所构成的复合物，大量的酶将保证SABC具有很高的敏感性。

操作步骤:(以石蜡切片为例)
1、切片常规脱蜡至水(三次二*苯，三次乙醇)。
2、3% H2O2室温处理5-10分钟以灭活内源性过氧化物酶，蒸馏水洗3次。
3、可选步聚：
a、热修复抗原，将切片浸入0.01M柠檬酸钠缓冲液(pH 6.0),电炉或微波炉加热至沸腾后断电，间隔5-10分钟后，反复1-2次。冷却后PBS(pH 7.2-7.6)洗涤1-2次。
b、酶消化，滴加消化液，37℃放置10分钟，PBS(pH7.2-7.4)洗涤2-3次。
c、跳过此步，直接进入下一步。

4、滴加5% BSA封闭液，室温20分钟，甩去多余液体, 免洗。
5、用稀释液将一抗按一定比例稀释(稀释后的一抗4℃可保存一周)，也可另行购买抗体稀释液。滴加稀释的一抗37℃ 孵育1小时左右或20℃ 孵育2小时左右，也可4℃过夜。PBS(pH7.2-7.4)洗涤3次，每次2分钟(一抗的稀释度、孵育时间和温度与染色强度、背景有直接关系。一般来说，阳性染色强度不够时，可提高一抗浓度和延长孵育时间;背景过高时，可降低一抗浓度和缩短孵育时间)。
6、根据用量，用稀释液将Bio-羊抗兔IgG浓缩液按1:50-100稀释成工作液(1mL稀释液加入10-20μL Bio-羊抗小鼠IgG浓缩液混匀，此工作液4℃可保存一周)。 滴加Bio-羊抗兔IgG工作液， 20-37℃孵育30分钟。PBS(pH7.2-7.4)洗涤3次，每次2分钟。
7、根据使用量，用稀释液将SABC-POD浓缩液按1:100稀释成工作液(1mL稀释液加入10μL SABC-POD浓缩液混匀，此工作液4℃可保存一周)。滴加SABC-POD工作液，20-37℃孵育30分钟。PBS (pH7.2-7.4)洗涤4次，每次5分钟。
8、DAB显色：根据用量，用PBS(pH7.2-7.4)配制，按1mL PBS加入50μL 20×DAB显色液A，加入50μL 20×DAB显色液B 。充分混匀后滴加到切片上，室温显色，镜下控制反应时间，一般在5-30分钟之间。蒸馏水洗涤终止反应。
9、苏木素轻度复染。脱水，透明，封片。显微镜观察。

对于细胞爬片，固定后，PBS漂洗两次，再用0.5% Triton X-100室温孵育20分钟，PBS漂洗两次，3% H2O2处理15分钟;PBS漂洗两次，接上述第4步。
对于冰冻切片，固定后，PBS漂洗两次，接上述第二步。

注意事项：如果染色背景过高，在SABC反应之后，DAB显色之前，用加有0.01—0.02% TWEEN-20的PBST(pH7.2-7.4)洗涤切片4次，PBS洗2次，然后DAB显色。

除了SABC免疫组化试剂盒(兔IgG)(POD显色),，我公司还供应以下相关产品：



名称：n-十二烷基β-D-麦芽糖苷
货号：BTN131046
规格：1g
本产品用于溶解膜蛋白并保持其活性。HPLC测定其纯度＞99%。低紫外吸收(1%溶液的A280＜0.04)。与其他的去垢剂相比能够更好地保持溶解后膜蛋白的活性。


储存条件：常温运输和保存，有效期一年。

名称：考马斯亮蓝G250
货号：YT626
规格：5g
本品是常用的蛋白染色剂。

分子式：C47H48N3O7S2Na
分子量：854.02

储存条件：室温。

名称：10%SDS溶液
货号：SNM400
规格：500ml

名称：电转移缓冲液(10X)
货号：SNM441
规格：500ml

名称：浓缩型SABC-FITC免疫荧光试剂盒(适用人/大鼠/小鼠/山羊/兔中一种)
货号：SNM501
规格：400张片

名称：5×双色蛋白上样缓冲液(还原)
货号：RFT070
规格：5×1ml
5×DualColor蛋白上样缓冲液(双染料)是5倍浓缩的SDS-PAGE凝胶电泳上样缓冲液，应用于还原型SDS-PAGE的蛋白样品制备和上样。该缓冲液中含有两种示踪染料：溴酚蓝和吡啰红Y，可以指示SDS-PAGE电泳过程以及Weastern blot的转膜效率。该缓冲液已经加入DTT，可使蛋白质分子的链内二硫键和链间二硫键断裂，经考马斯亮蓝染色以后在电泳凝胶上显现清晰蛋白条带。

操作步骤
融化-混合-变性-上样
1、将5×双色蛋白上样缓冲液37℃数分钟解冻后轻轻摇匀，以确保溶液混合均匀。
2、将缓冲液与蛋白样品按照1：4的比例混匀。
3、将蛋白样品置于95℃中加热5分钟。
4、待蛋白样品充分变性后冷却至室温，快甩离心收集到管底，直接加入SDS-PAGE凝胶加样孔内电泳。

注意事项：
1．由于含有DTT，该缓冲液不适合于Native SDS-PAGE电泳。
2. 一般说来，电泳中吡啰红Y泳动速度快于溴酚蓝，但在高浓度SDS-PAGE胶中(高于15%分离胶)，吡啰红Y泳动速度慢于溴酚蓝。

储存条件：-20℃。

名称：人源高氧化程度低密度脂蛋白
货号：SY0441
规格：2mg
我司提供的人源高氧化低密度脂蛋白（Human High Oxidized Low Density Lipoprotein，High Ox-LDL），是由过度铜离子介导人血浆来源的LDL进行的氧化修饰。新鲜血浆经检测为HCV，HBsAg和HIV阴性。本产品为无菌包装，可以直接稀释使用。本High Ox-LDL具有的高氧化水平使其产生明显的氧化应激，能够用来诱导细胞凋亡，以及建立细胞损伤模型。我们还提供中等氧化程度的Ox-LDL（SY0439），广泛用于脂质代谢的研究。除提供Ox-LDL，我们还提供人源乙酰化LDL（Ac-LDL），以及荧光标记的LDL。

LDL是由极低密度脂蛋白（VLDL）转变而来，主要功能是把胆固醇运输到全身各处细胞，运输到肝脏合成胆酸，其可用于研究受体介导的内吞作用过程，尤其是在动脉粥样硬化等疾病中，其血浆来源的LDL可用于研究LDL在功能和代谢中的氧化作用。

氧化的LDL（Ox-LDL）是修饰LDL中的一类。修饰的LDL除包括氧化修饰的LDL外，还包括乙酰化LDL及丙二醛（MDA）、4-羟烯酸（4-HNE）直接结合的LDL，这些未经氧化修饰而仅经一般化学修饰的LDL称为衍化的LDL。不同于衍化的LDL，Ox-LDL 的生理学独特性表现在：1）在细胞生理功能影响上，Ox-LDL可诱发细胞毒性作用，影响花生四烯酸的代谢，抑制胆固醇酯化作用等，但衍化的LDL无上述效应；2）Ox-LDL消耗LDL内源性抗氧化物质，使LDL上的维生素E含量下降，而MDA-LDL无上述效应；3）氧化修饰涉及脂质过氧化反应，LDL中的PUFAs被氧化。MDA对LDL修饰，是直接和ApoB-100结合成希夫氏碱，脂质过氧化反应轻微；4）氧化LDL在氧化程度低时，ApoB降解；在氧化程度高时，ApoB又可发生再聚合。MDA对LDL的修饰，ApoB无降解、聚合反应发生；5）Ox-LDL 产生的荧光峰波长为430nm，而MDA -LDL的荧光峰波长为460nm。Ox-LDL不经LDL受体代谢，由清道夫受体识别、结合、内吞饮入细胞并丧失正常的胆固醇代谢途径，引起细胞内脂质沉积，泡沫样变。

LDL氧化修饰的方式有很多种，常见的有：1）细胞介导的LDL氧化修饰，又称为生物氧化修饰的LDL。如内皮细胞，巨噬细胞，单核细胞都具有此功能；2）过度金属离子介导的LDL氧化修饰，如Ca2+，Fe2+等；还有其他形式的氧化修饰，包括物理方法如紫外线，或过氧化物酶催化。

蛋白纯度：＞97%（琼脂糖凝胶电泳）
蛋白浓度：0.8-3.0 mg/ml
外观：无色乳状液体
缓冲液组分（Buffer Components）：PBS, pH 7.4
氧化程度（Oxidized Level）：TBARS检测（根据MDA的含量反映LDL的氧化程度）
起始LDL：0.1~0.5 nmol MDA/mg蛋白
高Ox-LDL：90~100 nmol MDA/mg蛋白
储存条件：4℃，避光，有效期4周