DHE-ROS活性氧检测试剂盒

特别提示：包括DHE-ROS活性氧检测试剂盒在内，本公司的所有产品仅可用于科研实验，严禁用于临床医疗及其他非科研用途！

产品名称：DHE-ROS活性氧检测试剂盒
产品货号：HR8685
产品规格：200T

活性氧(Reactive oxygen species,ROS)包括超氧自由基、过氧化氢、及其下游产物过氧化物和羟化物等，参与细胞生长增殖、发育分化、衰老和凋亡以及许多生理和病理过程。
DHE活性氧检测试剂盒是一种利用荧光探针DHE(Dihydroethidium)进行活性氧检测的试剂盒。DHE可自由透过活细胞膜进入细胞内，并被细胞内的ROS 氧化，形成氧化乙啶；氧化乙啶可掺入染色体DNA中，产生红色荧光。根据活细胞中红色荧光的产生，可以判断细胞ROS含量的多少和变化。二氢乙啶在细胞内主要被超氧阴离子型ROS 氧化，用流式细胞仪或荧光显微镜可直接观察，是一种快速简便的组织或培养活细胞中ROS 经典检测方法。
在激发波长535nm，发射波长610 nm 附近，使用荧光显微镜、激光共聚焦显微镜、荧光分光光度计、荧光酶标仪、流式细胞仪等检测荧光，从而测定细胞内活性氧水平。
本试剂盒可以用于各种真核培养细胞、培养或灌流组织及组织冰冻切片的检测。本试剂盒提供了活性氧阳性对照试剂，以便于活性氧的检测。

储存条件：-20℃避光保存。
有效期：六个月。

注意事项：
●本试剂盒仅供科学研究使用，不可用于诊断或治疗。
● 螺旋盖微量试剂管装的试剂在开盖前请短暂离心，将盖和管内壁上的液体离心至管底，避免开盖时试剂损失。
● 禁止与其他品牌的试剂混用，否则会影响使用效果。
● 样品或试剂被细菌或真菌污染或试剂交叉污染可能会导致错误的结果。
● 最好使用一次性吸头、管、瓶或玻璃器皿，可重复使用的玻璃器皿必须在使用前清洗并彻底清除残留清洁剂。
● 避免皮肤或粘膜与试剂接触。

产品特点：
● 使用方便：可用激光共聚焦显微镜直接观察、荧光分光光度计、荧光酶标仪或流式细胞仪检测；
● 背景低，灵敏度高；
●线性范围宽，使用方便。

试剂盒以外自备试剂和仪器：
●培养基 ● 移液器及吸头 ●离心机 ● 激光共聚焦显微镜或荧光分光光度计或酶标仪或流式细胞仪，激发波长535nm，发射波长610 nm。

使用方法：

使用注意事项：
● 螺旋盖微量试剂管装的试剂在开盖前请短暂离心，将盖内壁上的液体收集至管底，避免开盖时液体洒落。
●荧光探针标记后，一定要洗净残余的未进入细胞内的探针，否则会导致背景较高。
●探针标记完毕并洗净残余探针后，可以进行激发波长的扫描和发射波长的扫描，以确认探针的标记情况是否正常。
● 尽量缩短探针标记后到测定所用的时间，以减少各种可能的误差。
●对于药物作用时间较短(2小时以内)的细胞，先标记探针，后用药物刺激细胞。对于药物作用时间较长(6小时以上)的细胞，先用活性氧阳性对照诱导剂或相应的药物刺激细胞，后标记探针。
●阳性对照诱导剂可以按照1:1000的比例使用。例如标记好探针的细胞共1毫升，可以加入1 微升的阳性对照诱导剂刺激。通常刺激后20-30分钟内可以观察到非常显著的活性氧水平升高。对于不同的细胞，活性氧阳性对照的效果可能有较大的差别。如果在刺激后30分钟内观察不到活性氧的升高，可以适当提高活性氧阳性对照诱导剂的浓度。如果活性氧升高得过快，可以适当降低活性氧阳性对照诱导剂的浓度。
● DHE在光照和空气中易被氧化，注意避光密封保存。
●对不同的细胞和组织，应选择合适的孵育时间和浓度，以观察ROS的变化。
DHE探针标记：
1．DHE溶液可在新鲜培养液、缓冲盐溶液或组织灌流液中稀释到所需浓度，100-1000倍稀释，以此染色液更换细胞培养液或灌流液；也可直接向细胞孵育液体或灌流液中加入DHE探针溶液至所需浓度。
2．依据细胞ROS含量的不同，DHE终浓度可选择在100-1000倍稀释的范围，孵育时间可选择10-90分钟，在37℃或室温进行避光孵育。
3．孵育结束后，用新鲜溶液清洗细胞或组织。
荧光显微镜检测：
1．对贴壁生长细胞或活组织，可直接在荧光显微镜下观察；对悬浮生长细胞，取25-50μl细胞悬液滴到一张显微载玻片上，再盖上一张盖玻片。
2．荧光显微镜下，用蓝光或绿光激发，观察和拍摄细胞红色发射图像，ROS阳性细胞在整个核区被染成红色；用紫外光激发时，胞浆中未氧化的二氢乙啶可发出蓝色荧光。
流式细胞仪分析：
1．对贴壁生长细胞，用胰酶消化制备成单细胞悬液；对悬浮生长细胞，直接收集细胞。
用0.5～1 ml冰冷PBS重悬细胞(5～10万)。
2．采用480～535 nm波长激发，测定590 nm～610 nm以上的发射，细胞应可分成两个亚群：ROS阴性细胞仅有很低的荧光强度，ROS阳性细胞有较强的红色荧光。

除了DHE-ROS活性氧检测试剂盒,，我公司还供应以下相关产品：



名称：GSSG和GSH检测试剂盒
货号：YT295
规格：共100次
本试剂盒是一种简单易行的可以分别检测出GSH(还原型谷胱甘肽)和GSSG(氧化型谷胱甘肽)含量的检测试剂盒。

通过谷胱甘肽还原酶把GSSG还原成GSH，而GSH可以和生色底物DTNB反应产生黄色的TNB和GSSG。适当配制反应体系，前后两个反应合并起来后，总谷胱甘肽(GSSG+GSH)就相当于一个颜色产生的限速因素，总谷胱甘肽的量就决定了黄色的TNB形成量。从而通过测定A412就可以计算出总谷胱甘肽的量。用适当试剂先清除样品中的GSH，然后利用上述反应原理就可以测定出GSSG的含量。用总谷胱甘肽(GSSG+GSH)的量扣除GSSG的含量，就可以计算出GSH的含量。

本试剂盒的具体反应原理如下：

两个反应相合并：


还原型谷胱甘肽是绝大多数活细胞中巯基的主要来源，对于维护蛋白巯基适当的氧化还原状态有重要作用，并且是动物细胞中关键的抗氧化剂。总谷胱甘肽中通常90-95%为还原型谷胱甘肽。

本试剂盒可以检测动物组织、血浆、红细胞、和培养细胞或其它适当样品中GSH和GSSG的含量。 本试剂盒提供了蛋白去除试剂M，可以更加准确地测定出含有蛋白的样品中的GSH和GSSG的量。 本试剂盒的检测下限为0.5微摩尔/升。一个试剂盒共可以进行100次检测，可以测定100个样品的总谷胱甘肽或GSSG的含量，或可以测定出50个样品中GSH和GSSG的各自含量。

试剂盒组分：
总谷胱甘肽检测缓冲液——————60ml
谷胱甘肽还原酶—————————150μl
氧化型谷胱甘肽 (GSSG)——————5mg
DTNB——————————————4.5mg
蛋白去除试剂M——————————1g
NADPH——————————————4mg
DMSO———————————————1.5ml
GSH清除辅助液——————————0.8ml
GSH清除试剂———————————160μl

注意事项：
1. 本试剂盒检测时牵涉到氧化还原反应，所有氧化剂或还原剂都会干扰本试剂盒的测定。特别是DTT、巯基乙醇等含有巯基的试剂会严重干扰本试剂盒的测定，请尽量避免。
2. 一定要严格控制反应时的温度和反应时间，否则每次都需做标准曲线。
3. NADPH等试剂不太稳定，要严格按照后续说明操作，谨防失活。
4. 蛋白去除试剂M溶液必须新鲜配制并限当日使用。GSH清除试剂也须新鲜稀释后使用。
5. 蛋白去除试剂M较难溶解，可以通过剧烈votex并适当加热(不超过37℃)以促进溶解。
6. DMSO在4℃、冰浴等较低温度情况下会凝固，可以20-25℃水浴温育片刻至全部融解后使用。
7. GSSG配制成溶液后，需适当分装，-20℃保存至少3个月有效。DTNB溶解于DMSO后，需适当分装，-20℃保存至少3个月有效。蛋白去除试剂M配制成溶液后仅限当天使用。NADPH溶解后，适当分装，-70℃保存。稀释的GSH清除辅助液和GSH清除试剂溶液均须新鲜配制使用。

储存条件：-20℃，有效期一年。