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- 详细信息
- 文献和实验
- 技术资料
- 库存:
256
- 英文名:
7-AAD Viability Staining Solution
- 保质期:
长期
- 供应商:
北京百奥莱博科技有限公司
- 保存条件:
4℃
- 规格:
150T
7-Aminoactinomycin D,简称7-AAD,是一种核酸染料,与DNA结合后可发出强烈的荧光,其荧光特性与PI相似,可被488nm氩离子激光激发,但其发射光谱较PI窄,且发射波长更长,对其他检测通道的干扰更小,在多色荧光分析中是PI的最佳替代品,可与多种488激发光激发的荧光染料联合使用,如FITC,PE等。
另外,7-AAD是一种非渗透性荧光染料。该染料不能透过活细胞的细胞膜,但可穿透膜损伤细胞如晚期凋亡细胞或者坏死细胞的细胞膜并与其内的DNA结合,可用来区分存活的早期细胞和坏死或晚期凋亡细胞,广泛用于流式细胞术检测。
注意事项
1)7-AAD为潜在致癌物质,操作时请穿戴手套、眼罩以及其他防护措施,以避免接触皮肤。
2)玻璃器皿上残留的去垢剂也会影响染色的效果,导致细胞存在或不存在都会出现强荧光。玻璃器皿的清洗应用去垢剂,然后用自来水冲洗数遍后,用去离子水或蒸馏水漂洗。
3)为了您的安全和健康,请穿实验服并戴一次性手套操作。
使用方法
【注】:7-AAD染色一般在其它染色完成后再进行,且仅仅染色死细胞。
样品在完成其他染色后,取0.5ml细胞悬液(~1×105个细胞),加入约10µl 7-AAD细胞活力染色剂,根据其激发发射波长(Ex/Em=545nm/650nm)在流式细胞仪下(FL3通道)检测荧光强度。
储存条件:4℃避光干燥
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文献和实验消化的方法同上), 消化完毕,加入已收集的培养液(注意一一对应,防止弄错)中和胰酶,离心(300g, 5min)收集细胞。 3.4 上机样本制备 收集细胞液(包括上清) 同时准备56℃水浴处理细胞 分别取一点 没有转染的细胞 作为control 及转染的细胞 作为GFP 单染样本 PBS 洗 染AnnexinV Ab-PE 染7-AAD 室温避光15min PE-mouse IgG 室温避光染色15min 1�binding buffer 洗两次
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测定细胞免疫功能首先要从人或动物外周血或组织中获取有活性的细胞,如淋巴细胞、巨噬细胞、粒细胞等。取得有活性的细胞应根据不同目的,采用不同方法,考虑(1)细胞纯度;(2)细胞获得量;(3)细胞活力;(4)使用方法的简易程度和本室条件等。目前常用Ficoll密度梯度离心法直接分离和纯化外周血单个核细胞。(一) 原理:常用来分离人外周血单个核细胞(PBMC)的分层液比重是 1.077±0.001 的 聚 蔗糖(Ficoll)-泛影葡胺(Urografin)(F/H)分层液。Ficoll是蔗糖的多聚
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